老年脑标本5羟色胺转运体的表达

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1、老年脑标本5羟色胺转运体的表达作者：石葛明王磊　李双成　崔慧先　刘砚星　王伟【摘要】目的观察老年人脑标本5羟色胺转运体的表达。方法以免疫放射自显影技术显示5羟色胺转运体在人脑标本的分布和强度。结果5羟色胺转运体免疫反应标记强度在老年组明显降低，中缝背核、尾状核、壳及整个中脑的5羟色胺转运体免疫反应强度比青年组分别降低了1622%(P＜005)、1764%(P＜005)、3125%(P＜005)和2558%(P＜001)，具有显著差异。结论老年人脑标本5羟色胺转运体的低表达表明在衰老过程中

2、5羟色胺转运体随年龄增加而表达减少。【关键词】5羟色胺转运体；免疫放射自显影；脑　5羟色胺转运体（serotonintransporter,SERT）是位于5羟色胺能神经末梢的一种膜蛋白〔1〕，其表达变化直接影响5羟色胺能神经元参与的神经活动。SERT作为常用抗抑郁药物的作用靶点〔2〕，其在老龄后的蛋白表达变化报道较少。目前关于SERT老龄改变的结果多基于SERT配基的放射自显影〔3,4〕及神经显像研究〔5,6〕，因受研究方法和所使用SERT配基特异性不高的限制，研究结果多不一致。本研究拟利用免疫放射自

3、显影技术对老龄人脑标本脑内SERT蛋白的表达进行分析，确定SERT蛋白表达的老龄改变，以期为今后临床应用正电子发射计算机体层扫描（PET)及单光子发射计算机体层扫描（SPECT）检测脑内SERT变化，诊断老年相关性疾病提供实验依据。　　1对象和方法　　11对象　　将死于非中枢神经系统疾病的人脑标本12例分为两组：青年组6例，年龄24～36岁，平均（3267±441）岁；老年组6例，年龄62～75岁，平均（6967±48）岁。　　　　12　取材　　脑标本在其死亡后12～22h自颅内取出。按需要

4、将脑切成厚约5mm脑块，经10%甲醛浸泡固定（96h）、常规脱水、透明、石蜡包埋。　　13免疫放射自显影　　石蜡块行常规切片（8μm）、裱片及脱蜡入水；001mol/L枸橼酸缓冲液（pH60）抗原修复、02%TritonX100、8%正常羊血清预处理（4℃，1h）；1∶100小鼠单克隆抗SERT抗体孵育（4℃，48h）；125I标记的羊抗小鼠IgG（1μCi/ml）室温孵育1h。125I标记的切片经洗片、风干，与贴有125I标准、14C标准的载片置于放射自显影盒内，载片上覆以Biomax

5、MS胶片(REF8326886)，曝光10d（脑干）、14d（纹状体区）行显影、定影。对照实验不用一抗，其余步骤相同。以固蓝复染上述切片，用于图像分析时的结构辨认。　　14图像密度分析　　扫描胶片（300dpi）以TIFF格式储存,用AIS软件测量感兴区密度。按Paxinos等编著的人脑图谱,镜下辨认复染切片的核团，用鼠标勾画相应核团图像边界。以125I标准校正的14C标准dards曲线测量边界内图像密度，计算胶片图像与切片对应核团的125I强度。所得值减去对照组相同核团背景标记值为特异性标记结果

6、（nCi/mg）。相关数据采用t检验。　　2结果　　21SERT标记的一般观察　　在所观察的脑区中，中脑除大脑脚底和红核以外的大部分区域均含有SERT免疫反应标记信号；端脑的尾状核、壳以及苍白球亦有SERT免疫反应标记信号存在。在这些标记区域中，以中脑中缝背核的SERT标记信号最强。两组无SERT标记信号分布上的差异，但存在SERT标记信号强度的区别，老年组SERT标记强度低于青年组（图1）。　　22SERT标记的强度分析　　见表1。除苍白球外，老年组中缝背核、尾状核及壳的SERT免疫反应强度比青年

7、组相同区域分别降低了1622%、1764%、3125%（P＜005）；整个中脑水平降低了2558%(P＜001)。所观察的对象中缝背核、尾状核、壳以及中脑每十年分别降低大约324%、353%、625%和512%。表15羟色胺转运体在老年脑标本不同脑区的标记强度(略)　　3讨论　　位于5羟色胺能神经末梢的膜蛋白SERT〔1〕通过摄取突触间隙的5羟色胺而中止其对突触后神经元的作用，是反映5羟色胺能神经元功能活动的重要指标〔7〕。我们通过对脑内SERT投射源区(中缝背核)和SERT投射靶区

8、（尾状核、壳和中脑等）的免疫放射自显影研究，发现老年组SERT蛋白表达明显低于青年组，表现出随年龄的增加而表达降低，其蛋白表达降低程度相当于每十年减少大约3%～6%。这一研究结果与近年利用SPECT/PET研究在体健康人脑内所观察到的结果基本相符〔5,6〕，即脑干间脑SERT和配基的结合信号与年龄增加呈负相关(SERT配基结合信号每十年降低4%～10%)。有研究表明，SERT在脑内的变化与人类的神经精神疾病密切相关〔8,9〕。躁狂病人中