谷氨酰胺对短肠综合征大鼠结肠黏膜细胞凋亡的影响

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1、谷氨酰胺对短肠综合征大鼠结肠黏膜细胞凋亡的影响作者:林方才，孙欣，赵大中，张耀，李光［摘要］目的探讨谷氨酰胺联合肠内营养对动物模型结肠黏膜凋亡的影响。方法将大鼠随机分为3组，即正常组，模型组、谷氨酰胺组21天两个时间点进行观察。结果谷氨酰胺组Bcl-2的平均灰度值及表达阳性的面积明显大于其他组，Bax基因蛋白平均灰度值及表达阳性的面积明显小于其他组（P<0.05）。结论谷氨酰胺能抑制结肠黏膜细胞的凋亡，促进结肠的代偿。［关键词］谷氨酰胺；短肠综合征；结肠黏膜；凋亡Influenceofglutaminetoapoptosisofcolonmucosaratofshortboemode

2、l［Abstract］ObjectiveTodetecttheinfluenceofglutaminebineducosamodel.MethodsRatshavebeendividedinto3groups，thatisnormalgroup，modelgroupandglutaminegroup，inegroupBcl-2andBaxgeneprotEin’saveragegraydensityandexpressionplanimeteraredifferentsignificantlyinegroupBcl-2andBaxgeneprotEIn’saveragegraydensit

3、yandexpressionplanimeteraresignificantlyinegroupcanpreventapoptosisofcolonmucosaenhancepensationofcolonmucosaofrats.［Keyine;shortboe;colonmucosa；apoptosis细胞凋亡是生物界重要的生命现象之一，结肠黏膜屏障的变化是肠内营养支持过程中结肠代偿的显著特点，结肠黏膜所有变化都是由凋亡基因和抗凋亡基因调控着，本研究采用免疫组化方法来观察短肠大鼠在行谷氨酰胺肠内营养支持过程中结肠黏膜凋亡变化的特点。1材料与方法1.1实验动物选择清洁级SD大鼠，雌雄各半

4、，雄性体重（325±25）g，雌性体重（320±15）g，6个月龄，由北京维通利华实验动物中心供给，合格证号为：京动许字(2000)第004号(总049号)。1.2实验环境大鼠饲养和实验均在北京中医药大学临床药理研究中心清洁级动物实验室内进行，合格证号为：SYXK11-00-0029，京动许字(1999)第039号，医动字第01-2094号(1999)。大鼠饲料为消毒饲料，由北京科澳协力饲料有限公司供给。大鼠垫料为消毒垫料，笼具用过氧乙酸溶液消毒。饮用水为消毒水。自由摄取食物和饮水，光照与黑暗为12h交替，室温为22℃～25℃。1.3药物百普素(PEPTI-2000variant)粉剂，由

5、短肽链乳清蛋白、中链甘油三酯和麦芽糖糊精等组成，由荷兰Nutricia公司生产，进口号X20000386。3.5%水合氯醛药理研究中心清洁级动物实验室自行配制。青霉素钠粉剂（华北制药股份有限公司生产，批号：9807128）。健脾敛肠汤（由党参、黄芪、白术、石榴皮等补气收涩的中药组成）。EDTA抗原修复液，Bcl-2抗体（大鼠IgG即用型抗体，美国SantaCruz公司，购自北京中山生物技术有限公司），抗抗体（大鼠IgG即用型抗体，美国SantaCruz公司），SP系列试剂盒(SistostainTM-SPkits)，其中包括封闭用山羊血清、生物素标记二抗、辣根酶标记链霉卵白素，DAB显色试

6、剂盒，所有免疫组化用试剂均购自北京中山生物技术有限公司。1.4仪器天平，代谢笼，光学显微镜（日本Olympus公司），半自动图像分析仪VIDSⅢ，OlivettiM24型（AMS公司，英国），SPOTⅡSOFTENTS公司），MetamorphImagingSystemVersion4.5图像分析软件(美国UniversalImagingCorporation公司)。1.5实验方法1.5.1动物分组将大鼠随机分为3组，即正常组、模型组、谷氨酰胺组，共24只，每组各8只，雌雄各半。1.5.2制作动物模型实验前适应性喂养大鼠1周，大鼠术前16～18h禁食，自由饮水。术前称体重，3.5％水合氯醛

7、(1ml/100mg)腹腔麻醉，麻醉成功后，将大鼠仰卧位缚于木板上，剪去腹部体毛，用碘伏溶液消毒手术区域，铺无菌巾单。做腹部正中切口，长约3cm，剖腹后找到肠系膜上的小肠静脉，注入生理盐水2ml，预防术中失血性休克。保留距Treitz韧带1cm近段空肠和距回盲瓣12cm的回肠，分段处理肠系膜，切除全部小肠，然后以6-0无损伤缝线行空回肠端端一层吻合，并于乙状结肠造瘘，插入直径3mm硅胶管，收紧结扎造瘘口的荷包缝线，将硅胶