tfu对肝门部胆管癌细胞系frh

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1、TFu对肝门部胆管癌细胞系FRH【摘要】目的：探讨N3邻甲苯甲酰基氟尿嘧啶（N3toluylFlulorouractilTFu）对FRH0201细胞的生物学效应及其作用机制，为胆管癌临床化疗提供参考。方法：光学显微镜、荧光显微镜观察FRH0201细胞在TFu作用后形态学变化；集落形成实验检测TFu对FRH0201细胞的增殖抑制作用；琼脂糖凝胶电泳检测DNALadder观察细胞的凋亡；流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡并与5Fu进行比较；MTT试验比较TFu与5Fu等常用化疗药物对FRH0201细胞抑制率。结果：TFu能体外抑制F

2、RH0201细胞的增殖，其作用在0.016~4mmol/L范围内具有浓度依赖性及时间依赖性，同浓度比较抑制率高于5Fu；流式细胞仪检测可见随作用时间延长，TFu及5Fu组G1细胞期增多，S期细胞减少，细胞增殖被阻滞在G1期；细胞凋亡检测可见，随作用时间延长，TFu及5Fu组较对照组细胞凋亡率增加，同时相TFu组凋亡率高于5Fu组；化疗敏感性比较，TFu抑制FRH0201细胞增殖作用不及阿霉素和顺铂，但明显优于5Fu及泰素，联合用药：阿霉素、顺铂和TFu联合对FRH0201细胞抑制率最高，达79.02%，优于阿霉素、顺铂、5Fu

3、联合。结论：TFu可明显抑制胆管癌细胞株FRH0201细胞的增殖，该抑制作用可能通过阻滞细胞周期并进一步诱导细胞凋亡机制发生，同摩尔浓度TFu较5Fu对FRH0201细胞抑制作用强，TFu可作为胆管癌联合化疗的新药。【关键词】胆管肿瘤・N3邻甲苯甲酰基氟尿嘧啶・氟脲嘧啶・细胞凋亡・细胞周期TheeffectofTFuontheapoptosisandproliferationofFRH0201cholangiocarcinomacellline【ABSTRACT】Obje

4、ctive:ToinvestigatetheeffectofTFuonFRH0201cellandtotestneotherapyofcholangiocarcinoma.Methods:Morphologicalchangesicroscopyandfluorescencemicroscopy.TheeffectofTFuonFRH0201cellinedbycloneformation.Cellcycleandapoptosisinedbyfloetricanalysis.DNAladderondrugsbyMTTcolo

5、rimetricassay.Results:TFusignificantlyinhibitedtheproliferationandcloneformationofFRH0201celllinemol/L.Theinhibitionratioe,andthatishigherthan5Fueconcentration.ThemorphologicalcharacterofapoptosisetricanalysisindicatedthatTFuinducedaG1phasearrestandapoptosismorethan

6、5Fu.ADM,DDPandTFucanreachthehighestinhibitionratio.Conclusion:TheseresultssuggeststhatTFucanmoresignificantlyinhibitedtheproliferationofFRH0201celllinethan5Fu.Themechanismmayberelatedtothecellcyclearrestinassociationayprovideanea.【KEYI1640细胞培养基（GIBICOBRL公司产品），胰蛋白酶（T

7、rypsin）(Amresco公司华美生物制品公司产品)，新生小牛血清（neonatalbovineserum,NBS）(杭州四季青公司产品)。四甲基偶氮唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DSMO）、吉姆萨色素购自Sigma公司。AnnexinVFITC/PI双染凋亡试剂盒（深圳晶美试剂公司）。1.2方法1.2.1细胞培养FRH0201细胞接种于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中，在5%CO2培养箱内37℃、饱合湿度下培养，细胞贴壁生长稳定，2~3d后细胞接近铺满瓶底，进行细胞传代。1.2.2形态学观察将FRH0201细胞接

8、种于24孔板内，加入含不同浓度TFu的培养液，使其终浓度为8、6、4、2、1、0.25、0.063、0.016mmol/L，并设对照组，每种浓度3个复孔，连续观察。72h后Giemsa染色观察细胞形态。制作细胞飞片，上述浓度TFu作用72h，取出玻片，PBS洗2次，甲醇固定1