促血管生成素2在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及其临床意义

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1、促血管生成素2在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及其临床意义【摘要】目的探讨促血管生成素2(Angiopoietin2,Ang2)在宫颈癌进展中的作用。方法采集50例宫颈鳞癌(Ⅰa~Ⅱa期)(SCC)及50例宫颈上皮内瘤变(CIN)标本,并以45例正常宫颈组织作为对照组;应用免疫组化法检测Ang2在上述三组中的表达;检测CD34的表达,计数各组微血管密度(MVD)。结果(1)Ang2在SCC中的阳性表达率79.6%,在CIN组织中的阳性表达率26.7%,对照组的表达率7.5%。SCC组Ang2的阳性率显著高于CIN组及对

2、照组,CIN组阳性率显著高于对照组(P0.05)。(2)SCC组MVD值显著高于CIN组及对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)SCC组织中,随分化程度的降低,Ang2表达的阳性率显著增高,差异具有统计学意义(P0.05)。(4)SCC及CIN组织中,MVD值与Ang2的表达强度呈显著正相关(r分别为0.61、0.52)。结论Ang2与的血管生成密切相关,参与了肿瘤的恶性生物学行为。【关键词】促血管生成素2;微血管密度;宫颈鳞癌;宫颈上皮内瘤变在体内,肿瘤性的血管生成受到多种血管生成因子的调控。促血管生成素2(A

3、ng2)是在血管生成过程中起重要作用的蛋白质〔1〕,主要作用是促进血管重构,在肿瘤血管新生过程中作用显著。本研究应用免疫组化SP法检测宫颈鳞癌(SCC)、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中Ang2的表达,同时定量检测微血管密度(MVD),观察SCC及CIN组织中Ang2的表达及其与临床病理特征的关系,为临床上宫颈癌的抗肿瘤血管生成治疗提供理论依据。  1材料与方法  1.1实验材料随机选取2007年1月至2009年1月本院病理科经手术切除及活检存档的蜡块。SCC50例,CIN50例(其中CINⅠ20例,CINⅡ17例,CINⅢ13

4、例);取45例正常宫颈组织为对照组。收集SCC患者的临床病理资料,包括:①年龄28~66岁,平均(42±14)岁;②病理分级:高分化25例、中分化15例、低分化10例;③采用国际妇产科联盟(FIGO)分期标准:I期32例,II期18例;④有无淋巴结转移:无淋巴结转移38例,有淋巴结转移12例(所有病例术前均未行任何治疗)。  1.2主要试剂SABC试剂盒、浓缩型兔抗人Ang2多克隆抗体购于武汉博士德公司。鼠抗人CD34多克隆抗体购于北京中山生物技术公司。  1.3方法采用SABC免疫组化方法检测Ang2及CD34蛋白的表达。石蜡

5、标本制成4μm切片常规脱蜡、水化,3%H2O2甲醇液阻断内源性过氧化酶,煮沸修复抗原,正常山羊血清封闭液,一抗(浓缩型兔抗人Ang2,鼠抗人CD34)4℃冰箱过夜,生物素化山羊抗兔IgG抗体,置入37℃温箱孵育20min,链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶溶液,同样置入37℃温箱孵育20min,使用DAB显色试剂盒,室温下显色,镜下控制反应时间,一般2~6min,以蒸馏水终止反应;苏木素复染,分化,脱水,透明,封片,显微镜下观察。所有操作按试剂盒说明进行。  1.4结果判定  1.4.1Ang2表达的测定凡细胞质有棕黄或棕褐色颗粒

6、沉着计数为Ang2阳性细胞,根据染色的程度及染色细胞的百分率进行评分。基本不着色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分,6%~25%为1分,26%~50%为2分,≥51%为3分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分相乘,为其最后得分。0~1分为阴性(-),2~3分为弱阳性(+),4~6分为中等阳性(),6分以上为强阳性()。  1.4.2CD34标记的MVD计数①CD34蛋白表达阳性以血管内皮细胞呈棕色或棕黄色染色为标准;②微血管计数以被染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇

7、作为1个血管计数。只要结构不相连,其分支结构也计作一个血管计数。肿瘤内硬化区及与肿瘤交界处软组织内的微血管,若有较厚的平滑肌及管腔直径大于8个红细胞的微血管除外;③随机选取5个高倍镜视野(40×10),分别计数微血管数,取其平均值。  1.5统计学处理采用SPSS13.0软件进行处理,数据以x±s表示。计量资料采用单因素方差分析,计数资料采用χ2检验,等级相关采用Spearman等级相关分析。  2结果  2.1Ang2在CIN和SCC中的表达Ang2主要定位于细胞质,呈棕黄色颗粒(见图1)。Ang2在对照组、CIN及SCC中

8、的阳性率分别为7.5%、26.7%、69.6%,SCC组Ang2的表达高于CIN组及对照组(P0.05);CIN组Ang2的表达亦高于对照组(P0.05)。  2.2CIN和SCC中的MVD差异对照组MVD值为10.34±2.83

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