促血管生成素2在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及其临床意义

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1、促血管生成素2在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达及其临床意义【摘要】目的探讨促血管生成素2(Angiopoietin2，Ang2)在宫颈癌进展中的作用。方法采集50例宫颈鳞癌(Ⅰa～Ⅱa期)(SCC)及50例宫颈上皮内瘤变(CIN)标本，并以45例正常宫颈组织作为对照组;应用免疫组化法检测Ang2在上述三组中的表达;检测CD34的表达，计数各组微血管密度(MVD)。结果(1)Ang2在SCC中的阳性表达率79.6%，在CIN组织中的阳性表达率26.7%，对照组的表达率7.5%。SCC组Ang2的阳性率显著高于CIN组及对照组，CIN组阳性率显著高于对

2、照组(P<0.05)。(2)SCC组MVD值显著高于CIN组及对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)SCC组织中，随分化程度的降低，Ang2表达的阳性率显著增高，差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)SCC及CIN组织中，MVD值与Ang2的表达强度呈显著正相关(r分别为0.61、0.52)。结论Ang2与的血管生成密切相关，参与了肿瘤的恶性生物学行为。【关键词】促血管生成素2;微血管密度;宫颈鳞癌;宫颈上皮内瘤变在体内,肿瘤性的血管生成受到多种血管生成因子的调控。促血管生成素2(Ang102)是在血管生成过程中起重

3、要作用的蛋白质〔1〕,主要作用是促进血管重构,在肿瘤血管新生过程中作用显著。本研究应用免疫组化SP法检测宫颈鳞癌(SCC)、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中Ang2的表达，同时定量检测微血管密度(MVD)，观察SCC及CIN组织中Ang2的表达及其与临床病理特征的关系，为临床上宫颈癌的抗肿瘤血管生成治疗提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1实验材料随机选取2007年1月至2009年1月本院病理科经手术切除及活检存档的蜡块。SCC50例，CIN50例(其中CINⅠ20例，CINⅡ17例，CINⅢ13例);取45例正常宫颈组织为对照组。收集SCC患者的临床病理资

4、料，包括：①年龄28～66岁，平均(42±14)岁;②病理分级：高分化25例、中分化15例、低分化10例;③采用国际妇产科联盟(FIGO)分期标准：I期32例，II期18例;④有无淋巴结转移：无淋巴结转移38例，有淋巴结转移12例(所有病例术前均未行任何治疗)。　　1.2主要试剂SABC试剂盒、浓缩型兔抗人Ang2多克隆抗体购于武汉博士德公司。鼠抗人CD34多克隆抗体购于北京中山生物技术公司。　　1.3方法采用SABC免疫组化方法检测Ang2及CD34蛋白的表达。石蜡标本制成4μm切片常规脱蜡、水化，3%H2O210甲醇液阻断内源性过氧化酶，煮沸修复抗原，

5、正常山羊血清封闭液，一抗(浓缩型兔抗人Ang2，鼠抗人CD34)4℃冰箱过夜，生物素化山羊抗兔IgG抗体，置入37℃温箱孵育20min，链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶溶液，同样置入37℃温箱孵育20min，使用DAB显色试剂盒，室温下显色，镜下控制反应时间，一般2～6min，以蒸馏水终止反应;苏木素复染，分化，脱水，透明，封片，显微镜下观察。所有操作按试剂盒说明进行。　　1.4结果判定　　1.4.1Ang2表达的测定凡细胞质有棕黄或棕褐色颗粒沉着计数为Ang2阳性细胞，根据染色的程度及染色细胞的百分率进行评分。基本不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，

6、棕褐色为3分;着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，≥51%为3分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分相乘，为其最后得分。0～1分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～6分为中等阳性()，6分以上为强阳性()。　　1.4.2CD34标记的MVD计数①CD34蛋白表达阳性以血管内皮细胞呈棕色或棕黄色染色为标准;②10微血管计数以被染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇作为1个血管计数。只要结构不相连，其分支结构也计作一个血管计数。肿瘤内硬化区及与肿瘤交界处软组织内的微血管，若有较厚的平滑肌及管腔直径大于8个红

7、细胞的微血管除外;③随机选取5个高倍镜视野(40×10)，分别计数微血管数，取其平均值。　　1.5统计学处理采用SPSS13.0软件进行处理，数据以x±s表示。计量资料采用单因素方差分析，计数资料采用χ2检验，等级相关采用Spearman等级相关分析。　　2结果　　2.1Ang2在CIN和SCC中的表达Ang2主要定位于细胞质，呈棕黄色颗粒(见图1)。Ang2在对照组、CIN及SCC中的阳性率分别为7.5%、26.7%、69.6%，SCC组Ang2的表达高于CIN组及对照组(P<0.05);CIN组Ang2的表达亦高于对照组(P<0.05)

8、。　　2.2CIN和SC