pvax1%2fsihgprt·sdisp和pvax1%2fil-18联合疫苗抗病免疫保护效果的研究

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1、分类号VDC硕士学位论文密级pVAXl／SjHGPRT·SDISP禾l：lpVAX1／IL．18联合疫苗的抗病免疫保护效果的研究ImmunoprotectioneffectofpVAX1／SjHGPRT·SDISPandpVAX1／IL一18combined-。一immunization作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导老师：冯其梅病原生物学基础医学院寄生虫学系汪世平教授论文答辩日期兰!!兰：圭：12答辩委员会主席中南大学二。一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

2、尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：#氅年—上月乒El学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部内容或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学

3、位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：逖．导师签名：／日期：挫钷月等日硕士学位论文中文摘要摘要研究背景血吸虫病在世界范围内广泛流行，严重影响人类健康与社会经济发展。经过60多年的规划防治，我国的血吸虫病防治工作取得了举世瞩目的巨大成就。目前，仅湖南、湖北、江西、安徽湖区四省尚未达到传播控制标准。湖区血吸虫病的流行，因其有螺面积大、钉螺孳生环境复杂、终宿主种类多、人畜流动频繁等原因，湖区四省部分疫区在达到疫情、传播控制甚至传播阻断标准后，仍出现钉螺面积增加、新发感染的急性病人等状况，

4、湖区血吸虫病防治任务依然繁重。因此，控制传染源为主的措施是我国当前血防工作的重要策略。通过免疫的方法，抑制雌虫生殖产卵、阻止虫卵胚胎发育、减少虫卵对肝肠组织的损害，减少免疫宿主粪卵的排放等，不仅从个体上减轻发病、控制疾病慢性化过程的发展，更重要的是，从源头上控制和阻断了血吸虫病的传播。本实验室前期研究已经证实SIEA及其SIEA26／28l(Da组分具有抗卵胚发育和抗雌虫生殖产卵的效果，从SIEA26／28kDa组分中筛选了3个抗原免疫反应最强的蛋白分子，其中两个分别与HGPRT、SDISP相关，随后采用不同的载体成功构建并表

5、达了SjHGPRT、SjSDISP，在动物免疫保护效果、安全性等方面进行了大量的研究，证明SjHGPRT、SjSDISP对免疫动物具有较好的抗卵免疫保护效果，而且安全性较好，具有潜在的现场应用价值。研究目的1．构建、表达及鉴定SjHGPRT·SDISP融合蛋白；本研究由国家科技支撑计划(2009BAl78805)、湖南省血吸虫病免疫与传播控制重点实验室、湖南省重点学科建设专项经费(No．07．985．2)联合资助硕士学位论文中文摘要2、观察pVAXl／IL一18与pVAXI／SjHGPRT·SDISP联合免疫小鼠的抗病效果及对

6、血吸虫性肝纤维化的影响。研究方法1．据SjHGPRT·SDISP基因的开放阅读框架(ORF)设计上下游引物，以pVAXIlSjHGPRT·SDISP质粒为模板，构建pET32a／SjHGPRT·SDISP，PCR、双酶切和DNA测序证实构建成功后，进行蛋白表达。2．50只5-6周龄雌性Balb／c鼠随机分组：NS对照组、pVAXl对照组、pVAXl／IL．18免疫组、pVAXl／SjHGPRT·SDISP免疫组、联合免疫组。每只小鼠肌肉注射100pg／100pl相应质粒，其中NS对照组注射1009lNS，联合免疫组采用1／2免

7、疫方案，每只小鼠注射5099／509lpVAXl／SjHGPRT·SDISP与50}tg／509lpVAXl／IL-18的质粒混合物。免疫两周后经腹部皮肤感染20士1条日本血吸虫尾蚴。免疫前及免疫后每2周小鼠尾静脉采血100p1并分离血清。感染56d后剖杀小鼠，收集成虫、虫卵并分别计算减虫率及减卵率。观察肝脏的外观及虫卵结节的数目，肝脏组织切片HE染色及masson染色，测量虫卵肉芽肿直径。检测各免疫组特异性IgG抗体含量及IL一4、IFN一丫的含量。研究结果1．PCR、双酶切及DNA测序结果证实构建质粒中的基因片段与SjHG

8、PRT·SDISP目的基因片段一致，对工程菌进行诱导表达后，在76．3kDa处获得了大量的表达蛋白，且在IPTG浓度为O．2mmol／L，温度为32℃诱导4h时蛋白的表达量最大，western．blot证实表达蛋白与预期蛋白一致。II硕士学位论文中文摘要2．pVAXl／SjH