药物敏感试验指导小鼠胃癌化疗对凋亡及p53基因的

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1、药物敏感试验指导小鼠胃癌化疗对凋亡及P53基因的【摘要】　　目的：通过应用药敏试验筛选化疗药物对多次传代的荷瘤鼠进行化疗，了解其疗效以及对移植瘤凋亡及P53基因的影响.方法：用MTT法检测小鼠胃癌细胞对6种化疗药物的敏感性，对荷瘤鼠进行化疗，观察化疗后移植瘤的体积、抑瘤率，检测凋亡及P53基因的表达.结果：用MTT法筛选最敏感的化疗药5FU对第一代荷瘤小鼠进行化疗，其抑瘤率高，凋亡率高，P53基因的表达下降，与对照组比较有显著性差异；最不敏感的ADM化疗组抑瘤率低，凋亡率低，P53基因的表达高于对照组(P＜0.05).再对已行化疗的胃癌细胞筛选最敏感药物为DDP，最不敏感药

2、物为用MMC，对第二代荷瘤小鼠进行化疗，发现DDP组抑瘤率高，凋亡率高，P53基因的表达较对照组低(P＜0.05)；MMC组抑瘤率低，凋亡率低,P53蛋白表达高，与对照组比较无显著性差异.而继用5FU和ADM化疗对第二代荷瘤小鼠进行化疗，抑瘤率低，凋亡率低，P53基因的表达高，与对照组比较无显著性差异.结论：药敏试验、凋亡及P53基因的检测可作为化疗药物的选择及判断预后的指标.【关键词】药物敏感试验胃肿瘤细胞凋亡基因P530引言如何选择敏感抗癌药，制定胃癌的个体化治疗方案，是提高胃癌化疗的关键.我们通过应用小鼠胃癌细胞筛选化疗药物，对多次传代的荷瘤鼠进行化疗，检测化疗后小鼠

3、胃癌组织中P53的表达及凋亡情况，并分析是否与其临床疗效一致，探讨临床化疗药物的选择、对荷瘤鼠胃癌组织中P53的表达和凋亡的影响，以便实施科学的、药物适配的个体化方案.1材料和方法1.1材料小鼠胃癌细胞株MFCTCM23(中科院上海细胞所)；MTT，细胞培养基，胎牛血清，TUNEL，P53试剂盒购自武汉博士德公司.卡铂(CBP)、顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、5氟尿嘧啶(5FU)、甲氨蝶呤(MTX)、丝裂霉素(MMC)均为国产药品.昆明小鼠(清洁级,购自南方医科大学实验动物中心,珠江医院动物所饲养),雄性,1月龄,体质量18~22g.1.2方法1.2.1胃癌细胞株对化

4、疗药物敏感性取对数生长期细胞制成含活细胞(3~6)×108/L的细胞悬液，在96孔培养板中每孔加入胃癌细胞悬液200μL，培养贴壁后离心去上清，加入培养液190μL/孔,加入下列抗肿瘤药物10μL/孔,即CBP,DDP,ADM,5FU,MTX,MMC，每种药物终浓度为血浆峰值浓度，每种药物3个复孔，阴性对照为培养液,37℃CO2培养48h，取出各孔加MTT(5g/L)20μL,继续培养4h,离心弃上清后,每孔加二甲基亚砜100μL终止反应.置酶标仪测定各孔在570nm波长值.抑制率=［1-用药组A/对照组A］×100%.根据抑制率筛选敏感、不敏感化疗药物.CBP,DDP,A

5、DM,5FU,MTX,MMC的抑制率为41.9%,47.2%,26.5%,49.6%,31.2%,30.0%,5FU抑制率最高，ADM抑制率最低.1.2.2动物模型及分组将MFC细胞制成含活细胞109/L细胞悬液0.1mL，接种于小鼠后肢皮下,约7d在接种部位长出直径1.5cm左右的移植瘤.对照组1：用胃癌细胞株接种小鼠10只，接种7d末鼠尾静脉给予生理盐水0.2mL，共5d，接种12d末处死小鼠取瘤块.实验组1：用胃癌细胞株接种小鼠10只，接种7d末鼠尾静脉给予5FU（高敏感药），30mg/（kg·d），共5d，化疗5d末处死小鼠取瘤块.实验组2：用胃癌细胞株接种小鼠

6、10只，接种7d末鼠尾静脉给予ADM（低敏感药），0.8mg/（kg·d），共5d，化疗5d末处死小鼠取瘤块.处死小鼠后瘤块一部分作石蜡包埋，一部分制成单个细胞悬液再接种小鼠，实验组1、实验组2的10只小鼠的一部分单个细胞悬液再行MTT法检测化疗药物敏感性，已用5FU化疗后的小鼠胃癌细胞对CBP,DDP,ADM,5FU,MTX,MMC的抑制率为47.8%,50.2%,14.9%,23.5%,35.0%,35.5%,筛选出最敏感的化疗药物为DDP.已用ADM化疗后的小鼠胃癌细胞对CBP,DDP,ADM,5FU,MTX,MMC的抑制率为41.6%,32.3%,22.2%,3

7、7.0%,35.9%,20.2%，筛选出最不敏感的化疗药物为MMC.　对照组2：用对照组1的10只小鼠胃癌细胞再接种小鼠10只，接种7d末鼠尾静脉给予生理盐水0.2mL，共5d，接种12d末处死小鼠取瘤块.实验组3：用实验组1的10只小鼠胃癌细胞再接种小鼠10只，接种7d末鼠尾静脉给予5FU，30mg/（kg·d），共5d，化疗5d末处死小鼠取瘤块.实验组4：用实验组2的10只小鼠胃癌细胞再接种小鼠10只，接种7d末鼠尾静脉给予ADM，0.8mg/（kg·d），共5d，化疗5d末处死小鼠取瘤块.实验组