成人不同部位角质形成细胞的生物学特性比较

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1、成人不同部位角质形成细胞的生物学特性比较作者：韩军涛，王洪涛，胡大海，蔡维霞，汤朝武【摘要】目的:观察成人不同部位角质形成细胞的生物学差异，探讨用来构建自体组织工程皮肤的最佳表皮细胞来源.方法:体外分离培养成年男性头皮、躯干、下肢及包皮来源的角质形成细胞，分别利用绘制细胞生长曲线、3H胸腺嘧啶（3HTdR）掺入、流式细胞仪检测等方法比较细胞在生长增殖、细胞周期及代谢等方面的生物学差异.结果:在细胞的生长增殖及DNA合成代谢方面，头皮与包皮来源的角质形成细胞之间无统计学差异（P>0.05），躯干与肢体

2、来源的细胞之间亦无统计学差异（P>0.05），但前两者均高于后两者（P<0.05）；细胞周期分析表明，头皮及包皮来源的角质形成细胞S期比例高于躯干及肢体组.结论:头皮及包皮组织来源的角质形成细胞可作为构建自体组织工程皮肤的表皮细胞来源.【关键词】角质形成细胞；细胞培养　　【Abstract】AIM:Toinvestigatethebiologicalcharacteristicsofkeratinocytesderivedfromdifferentpartsofthehumanskinanddis

3、cussanoptimalseedfortheconstructionoftissueengineeredskin.METHODS:Thehumankeratinocytesthedifferentpartsofhumanmaleskinsuchasforeskin,scalp,trunkandlimbs(aged25-35years).Thekeratinocytesfreeculturemediuminvitro.ThegroployedtomeasuretheDNAmetabolism.Thecellc

4、ycleinedetry.RESULTS:FortheDNAmetabolismandcellproliferation,thereeresultstrunkandlimbsgroups（P>0.05）.Thedifferencebs（P<0.05）.ThepercentageofcellsinSphaseofscalpandforeskingroupsuchhigherthanthatoftrunkandlimbsgroups.CONCLUSION:Itmightbebettertotaketh

5、ekeratinocytesfromscalporforeskinastheseedingcellstoconstructthetissueengineeredskin.　　【Keya公司；MTT购自华美生物工程公司；550型酶标仪购自美国BioRad公司；流式细胞仪购自美国BectonDickinson公司；3HTdR购自中科院原子能物理研究所.头皮、躯干及肢体皮肤标本取自25～35岁男性烧伤患者（烧伤总面积≤30％，其中III度≤10％）；包皮标本取自相同年龄段包皮环切术后.所有标本均经患者及家属知情同

6、意.　　1.2方法　　1.2.1HKC的分组及体外培养细胞按所取部位分为头皮（scalp）、躯干（trunk）、肢体（limbs）及包皮（foreskin）4组.将所取标本剪成30mm×5mm皮条，置于2.5g/Ldispase酶中4℃消化过夜，剥离之表皮以0.01mmol/LPBS冲洗3遍，再置于2.5g/L胰蛋白酶与0.2g/LEDTA混合液(体积比为1∶1)中，37℃消化5min，终止消化后吹打、过滤、离心，收集细胞，用KSFM培养基重悬后调整细胞浓度为5×108/L，接种六孔板，每孔2mL，每2～3

7、d更换培养液1次.待细胞70%～80%融合时用上述混合消化液消化传代，比例为1∶2.　　1.2.2观察指标　　①细胞的生长增殖情况（四唑盐MTT比色法）：取第二代处于对数生长期细胞，同上消化细胞并收集后，以KSFM培养基重悬，调整细胞浓度为5×107/L，接种96孔板，每孔100μL，每组2个复孔，37.0℃，50mL/LCO2孵箱中孵育2h后加入KSFM培养基300μL/孔，继续培养24h后将第一组细胞每孔加入20mLMTT（20g/L），孵育4h后弃上清，每孔加入0.5mL二甲基亚砜，振荡30min后

8、选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定每个孔A值.此后每天于相同时间点连续测量12d并绘制细胞生长曲线.②细胞的DNA合成代谢情况：取第二代处于对数生长期细胞，同上方法消化接种96孔板，细胞密度为1×104/孔.接种24h后换液并加入3HTdR37kBq/孔，继续培养24h后弃培养基，加入2.5g/L胰蛋白酶200μL/孔，37.0℃消化细胞5min，吹打分散后加入等量100g/L三氯醋酸，4