兽医免疫学实习指导

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1、实验一免疫学基础实验----动物试验[目的]掌握实验动物的接种、采血及解剖方法和注意事项。掌握血清的方法。[原理]在微生物实验研究工作中,动物实验也是常用的技术之一。其主要用途有：1.病原体的分离鉴定有些直接分离培养有困难的病料或需鉴定的细菌通过易感动物体就可达到目的。2.确定病原体的致病力有些细菌的形态、生物学方面性状相似。仅在致病力上不同，可利用动物实验鉴别3.恢复或增强细菌的毒力多数病原菌长期经过人工保存后，其毒力减弱，需通过易感动物保持原来的致病力4.测定某些细菌的外毒素如魏氏梭菌的毒素测定5.制备疫苗或诊断用抗原如兔化猪瘟疫苗6.制备作诊断或治疗用的免疫血清如作鉴定用的沙门氏菌诊断血

2、清7.用于检验药物的治疗效果及毒性等[实验材料]1.接种材料大肠杆菌的肉汤培养物2.实验动物家兔，小白鼠3.其他物品注射器（1mL、10mL），针头（4#、5#、6#、16#），酒精棉，镊子，解剖板，剪刀，手术刀等。[实验内容]1.接种(1)皮下接种（注射）a．家兔由助手把家兔伏卧或仰卧保定，于其背侧或腹侧皮下结缔组织疏松部位剪毛消毒，术者右手持注射器，以左手拇指、食指和中指捏起皮肤呈一个三角皱摺于其底部进针。注射时针头斜面朝上,斜刺入皮下，感到针头可随意拨动即表示插入皮下，10缓缓注入接种物0.1-0.2mL,当推入注射物时感到流利通畅也表示在皮下。拔出针头后用酒精棉球按住针孔并稍加按摩。b

3、．小鼠无须助手保定。术者在做好接种准备后，先用右手抓住鼠尾，令其前爪抓住饲料罐的铁丝盖，然后用左手的拇指及食指捏住颈部皮肤，并翻转后使小鼠腹部朝上，将其尾巴夹在手掌与小指之间，右手消毒术部，把持注射器，以针头稍微挑起皮肤插入皮下，注入时见有水泡微微鼓起即表示注入。(2)皮内接种方法同（1）。接种者以左手拇指及食指夹起皮肤，右手持注射器，用针头插入拇指及食指之间的皮肤内，针头插入不宜过深，同时插入角度要小，注入时感到有阻力且注射完毕后皮肤上有硬泡即为注入皮肤。皮内接种要慢，以防止皮肤胀裂或自针头流出注射物而散播传染。针头平行刺入皮肤真皮内，挑起，注入接种物。注射时有明显的阻力，注射后局部出现一个

4、小水泡。(3)腹腔接种小鼠腹腔接种---接种时稍抬高后躯，使其内脏倾向前腔，在股后侧面插入针头，先刺入皮肤，后进入腹腔，注射时应无阻力有落空的感觉，皮肤也无泡隆起。(4)肌肉注射注射部位选择后肢股部。术部消毒后，将针头刺入肌肉内，注射感染材料。(5)静脉注射a.家兔耳静脉将家兔保定，选一侧耳边缘静脉，先用70%的酒精涂擦兔耳或以手轻弹耳朵，使静脉怒张。注射时，用左手拇指和食指拉紧兔耳，右手持注射器，使针头与静脉平行，向心脏方向刺入静脉内，注射时无阻力且有血向前流动即表示注入。注射完毕后用酒精棉球紧压针孔，以免流血和注射物溢出。b.小白鼠注射部位选择尾静脉。选15-20g体重的小鼠，注射前将尾部

5、浸于温水中1-2分或酒精棉球涂擦，使尾部血管扩张易于注射。用一烧杯扣住小鼠，露出尾部，用最小的针头刺入尾静脉，缓缓注入注射物，注射时无阻力，皮肤不变白、不隆起则表示注入。102.采血—家兔心脏采血将家兔仰卧保定。术者在左前肢腋下处局部剪毛消毒，在胸部心跳最明显处下针，直刺心脏，感到针头跳动或有血液向针管内流动时即可抽血。3.解剖—小白鼠剖解处死小鼠后,将小鼠固定在解剖板上,消毒剪刀镊子，局部消毒皮肤后，依次打开皮肤—腹膜—肌肉，观察各脏器的形态。[实验报告]简述各项操作方法的过程及其注意事项。[思考题]1.实验动物在微生物学实验中有何重要意义？2.在实验中为何要严格无菌操作？实验二抗原的制备[

6、目的]掌握抗原的制备过程。[原理]要制备优质免疫血清，抗原的质量是先决条件。抗原的免疫原性除与其分子量的大小有关外，还与其表面抗原决定簇的性质、位置立体构型有密切的关系。一种抗原成分可刺激机体产生一种抗体，因此在免疫动物前应纯化抗原，抗原的用量也应根据抗原的性质、免疫动物的种类和需要的抗体的特性决定。一般认为，采用多次小剂量、逐步递增法注射。[实验材料]1.接种材料羊血清；细菌培养物2.实验动物家兔3.其他物品注射器、量筒、烧杯、吸管、滴管、酒精棉，镊子，剪刀，手术刀等。4.试剂硫酸铝钾、0.01%硫柳汞生理盐水、蒸馏水等[实验内容]1.血清抗原的制备（将血液置37℃温箱1h，再置4℃10冰箱

7、内3-4h或过夜。待血液凝固血块收缩后，用毛细滴管吸取血清，以3000rpm,15min取上清）血清5/25mL蒸馏水16/80mL100g/L的钾明矾（硫酸铝钾）水溶液18/90mL混合---用5mol/L的NaOH滴定PH约6.5---离心，去上清液—用0.1g/L的硫柳汞生理盐水离心洗涤2次—沉淀物加0.1g/L的硫柳汞生理盐水至50/100mL4℃保存。2.全菌抗原的制备斜面培养物---生