基于动物体内指标的枇杷果利尿活性物质部位及单体筛选研究

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1、基于动物体内指标的枇杷果利尿活性物质部位及单体筛选研究罗彭，任赛赛，梁宁，陈攀，廖彭莹，潘为高（广西中医药大学，南宁５３０００１）摘要：为研究枇杷［Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｌｉｎｄｌ．］果的动物体内利尿作用，获得利尿活性物质部位和活性单体，阐述枇杷果利尿作用的物质基础，为开发和研制枇杷果植物药利尿剂奠定基础，通过试剂法提取、系统溶剂萃取制备枇杷果各极性物质部位。依据生物活性跟踪法，以小鼠体内利尿为活性指标，柱色谱等为分离纯化方法，筛选出利尿物质部位，并进一步追踪利尿单体。追踪过程中通过先小量摸索、后大量分离制备的策略，解决体内给

2、药剂量过大的问题。通过波谱法鉴定单体结构。结果表明，枇杷果乙醇提取物的乙酸乙酯萃取段有较显著的体内利尿活性（Ｐ＜０．０５），利尿强度接近氢氯噻嗪而稍弱于呋噻米，利尿作用速度较缓和。从乙酸乙酯萃取段中分离纯化获得一个利尿活性物质，经鉴定为熊果酸，利尿作用显著（Ｐ＜０．０５），利尿强度接近氢氯噻嗪而稍弱于呋噻米，利尿作用速度较缓和。枇杷果药食两用，其乙酸乙酯萃取段可有望开发为长期使用的安全天然利尿药物。熊果酸是枇杷果利尿作用的物质基础，其含量可作为该药材利尿用途方面的质量控制指标。该研究是直接通过动物体内药理指标筛选活性单体成功的不多案例之一，具有方法学借鉴价

3、值。..关键词：枇杷［Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｌｉｎｄｌ．］果；乙酸乙酯部位；熊果酸；利尿；体内；生物活性跟踪法中图分类号：Ｓ６６７．３；Ｒ９３１．６文献标识码：A：0439－８114（２０15）16－3986-04DOI:10.14088/j.ki.issn0439-8114.2015.16.039收稿日期：2015-05-28基金项目：广西壮族自治区教育厅科研项目（２０１３ＹＢ１２５）；广西高等学校高水平创新团队及卓越学者计划资助项目［桂教人（２０１４）７号］；广西高校重点实验室资助项目［桂教科研（２０１４）６号］简介：罗彭

4、（１９８２－），女，湖北潜江人，讲师，硕士，主要从事民族药活性成分研究，（）１５９０７７１５１５０（电子信箱）ｌｃｌ４０２６１４６１＠１６３．ｃｏｍ；通信，潘为高（１９７７－），男（瑶族），广西兴安人，教授，博士，主要从事天然药物活性成分研究，（）１５９９４３５１０９４（电子信箱）ａｇａｏ８１７０６６７２＠１６３．ｃｏｍ。枇杷（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｌｉｎｄｌ．）为蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）枇杷属植物，原产于中国，是中国南方特产的常绿果树，主要分布于中国南部及陕西、甘肃、江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、四川、贵州、云南等地

5、［１］。枇杷已在中国、日本、印度、西班牙、巴西、美国、澳大利亚、南非等世界各国进行商业化规模种植［２］。中国是世界上最主要的枇杷生产国，栽培面积和产量占世界的７０％以上［３］。枇杷果实除鲜食外，果肉可生产枇杷酒、罐头、饮料、糖浆剂等，有润肺、止咳、生津的功效［３］。据报道，枇杷（包括果、叶）的苦杏仁苷有镇咳平喘作用［４］，其中的三萜化合物有抗炎抗免疫作用［５］，另外枇杷还有降血糖、抗癌、抗氧化、保肝等作用［１，６］。但现代研究中并无任何关于枇杷利尿作用的报道。枇杷果在中国传统中药记载中，有润肺止咳（果肉）、消除水肿（果核）等功效［７］，而消除水肿与利尿有密

6、切关系。笔者前期发现给动物喂食枇杷果肉也具有良好的利尿作用。考虑到枇杷果核的潜在毒性作用，本研究只使用了其果肉进行利尿研究。一方面拟测定枇杷果利尿活性的作用强度，另一方面拟通过生物活性跟踪法，追踪分离枇杷果中利尿活性成分，探索枇杷果利尿作用的物质基础。１材料与方法１．１材料与设备药材：枇杷鲜果购自广西武鸣县，经广西中医药大学韦松基教授和朱意麟实验师作生药学鉴定。对照药品：呋噻米（Ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ）为江西亚邦爱普森药业有限公司产品，氢氯噻嗪（Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｏｔｈｉａｚｉｄｅ，ＨＣＴＺ）为山西云鹏制药有限公司产品。动物：昆明种ＳＰＦ级小鼠，（２０±２

7、）ｇ，由广西医科大学实验动物中心提供。仪器设备：ＡＥ１００型１/１００００电子分析天平（日本岛津公司）；代谢笼；ＳａｒｔｏｒｉｕｓＢＰ１２１Ｓ型电子天平（精度０．１ｍｇ）；ＢｒｕｃｋＤｒｘ－５００型核磁仪（Ｂｒｕｃｋｅｒ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）；ＦｉｎｎｉｇａｎＴｒａｃｅＤＳＱ质谱仪（ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ，ＳａｎＪｏｓｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）。１．２试验方法１．２．１体内利尿活性测定参照Ａｂｄａｌａ等［８］的小鼠代谢笼法，并作适当修改：所有试验均在同一实验室中进行，小鼠饲养条件一致，１２ｈ／１２ｈ的光暗循环，室温控制在２４

8、℃左右，实验室安静、通风。试验前３ｄ置同一实验室观察饲养，自由摄食