复合人工骨修复犬股骨头缺损坏死中再血管化与钙含量的关系

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1、复合人工骨修复犬股骨头缺损坏死中再血管化与钙含量的关系作者：刘钢，彭吾训，邓进，龚跃昆，李世和【摘要】［目的］观察骨形成蛋白（bonemorphogeicprotEin，BMP）、碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrooralheadnecrosis，FHN）病灶清除区缺损，评价bFGF对FHN的再血管化作用及其与钙含量的关系。［方法］取18只杂种犬共36侧股骨头，建立液氮冷冻诱导性犬股骨头缺损坏死模型，随机分为A、B、C3组，每组12侧。A组为空白对照，B组植入AACB／BMP，C组植入AACB/BMP／bFGF。每个股骨头内植入AA

2、CB约0.33g，BMP约12.5mg，bFGF约2000U。术后3、6和12周分批处死动物，每组每次处死2只。行组织学观察，免疫组织化学染色，进行血管计数和血管面积图像分析、钙含量测定、并分析再血管化作用与钙含量间的关系。［结果］组织学观察，12周时A组以纤维结缔组织为主，B组多量新生骨组织形成，密度不均，C组股骨头骨缺损完全修复。血管计数和血管面积，C组术后3周移植物孔隙内大量血管增生，6和12周时血管数量和血管面积进一步增加，各时间点都大于A、B组，具有统计学意义（P＜0.05）。钙含量，C组术后3周钙含量小于B组，12周时大于B组（P＜0.05）。再

3、血管化作用与钙含量的关系，C组与B组比较，术后3周时再血管化与钙含量呈负相关，12周时呈正相关。［结论］AACB是生长因子的良好吸附载体，适宜新生血管长入。吸附有bFGF及BMP的AACB具有较强的再血管化能力，bFGF促进植骨材料吸收，加速新骨形成。这一疗法有望成为FHN治疗的一种手段。【关键词】股骨头坏死；骨形成蛋白；碱性成纤维细胞生长因子；异体骨　　股骨头坏死（femoralheadnecrosis,FHN）为临床上常见的骨科疾病，其治疗较棘手。骨形成蛋白（bonemorphogeicprotein,BMP）和碱性成纤维细胞生长因子（basicfibr

4、oblastgro的骨缺损，不植入任何材料；B组植入AACB／BMP；C组植入AACB／BMP／bFGF。术后3、6和12周分批各处死2只犬取4侧股骨头，进行观察分析。　　1.3观察指标　　1.3.1大体观察　　动物处死后，解剖股骨头行剖面大体观察。　　1.3.2组织学观察　　股骨头以10％甲醛固定，硝酸脱钙，石蜡包埋，切片后HE染色，光镜观察。　　1.3.3免疫组织化学染色、血管计数和血管面积图像分析　　采用CD34单克隆抗体。切片厚4μm，按常规ABC法进行免疫组织化学染色。阳性为棕黄色，定位于血管内皮细胞胞浆，以已知阳性组织切片为阳性对照。在每张切片的

5、用人工骨修复后原缺损区随机选取3个100倍视野行血管计数。采用HPIAS1000高清晰度彩色病理图文报告分析系统测定血管面积，血管面积=血管截面面积／统计场面积×100％。　　1.3.4钙含量测定、血管数和血管面积与钙含量的关系分析　　采用XL30扫描电镜能谱分析仪测定缺损区修复后的钙含量。用SPSS11.5软件分析血管数及血管面积与钙含量的关系。　　1.4统计学处理　　用SPSS11.5统计软件包分析处理所有数据，以均数±标准差表示，采用组间单因素方差分析和相关性分析，P＜0.05为有统计学意义。　　2结果　　2.1大体观察　　A组：3和6周缺损清晰可

6、见，12周仍有缺损残存；B组：3周移植物色红润，12周多量新生骨组织形成，密度不均；C组：3周肉芽组织生长活跃，色红润，大量新骨形成，12周与宿主骨颜色及密度一致，界限不清。　　2.2组织学观察　　A组：3、6和12周缺损区始终以纤维结缔组织为主。B组：3周纤维组织长入移植物孔隙内，6周移植物大部分吸收，12周移植物完全吸收，多量新生骨组织形成。C组：3周肉芽组织生长活跃，移植物6周完全吸收，大量新骨形成，12周骨改建接近正常，与宿主骨界限不清。　　2.3免疫组织化学　　免疫组织化学染色光镜下观察见，A组：术后3、6和12周血管稀疏散在，B组：血管数量少，分

7、布散在，C组：各时间点血管丰富，吻合成网（图1）。　　图1术后6周免疫组织化学显示血管化程度（×100）（略）　　a.A组血管稀少;b.B组血管数量少，分布散在;c.C组血管丰富，吻合成网　　2.4血管计数　　免疫组织化学染色光镜下进行血管计数，经方差分析，在各时点A组血管数少于B组（P＜0.05），A、B组少于C组（P＜0.05）（表1）。　　表1各时点血管计数（略）　　*与A组比较，P＜0.05；#与B组比较，P＜0.05。　　2.5血管面积　　测定血管面积后经方差分析，在各时点A组血管面积小于B组（P＜0.05），A、B组小于C组（P＜0.05）（表2

8、）。　　表2各时点血管面积比较（略）　　*与A组比较