血管性痴呆模型大鼠海马中gap-43、gdnf表达与学习记忆关系的研究

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1、学校代码10459学号或申请号密级公开硕士学位论文血管性痴呆模型大鼠海马中GAP-43、GDNF表达与学习记忆关系的研究作者姓名：闫光导师姓名：刘献志学科门类：医学专业名称：神经外科培养院系：郑州大学第一临床学院完成时间：2014年10月万方数据AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityForthedegreeofMasterStudyontherelationshipbetweenlearning，memoryandexpressionofGAP-43andGDNFinhippocampusofratmodelofvasculardementiaByG

2、uangYanSupervisor:Prof.XianzhiLiuDepartmentofNeurosurgeryTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityOctober，2014万方数据原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知,除文中已经标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关

3、的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日万方数据摘要血管性痴呆模型大鼠海马中GAP-43、GDNF表达与学习记忆关系的研究研究生闫光导师刘献志教授郑州大学第一附属医院神经外科专业河南郑州201

4、4摘要目的通过建立血管性痴呆SD(Sprague-Dawley)大鼠模型，采用避暗试验观察血管性痴呆模型大鼠在不同时间段学习记忆功能的变化，检测血管性痴呆模型大鼠海马组织中神经生长相关蛋白(neuronalgrowthassociatedprotein,GAP-43)、胶质细胞源性神经营养因子（glialcellline-derivedneurotrophicfactor，GDNF）的表达，进一步探讨GAP-43、GDNF与学习记忆之间的关系。方法1.血管性痴呆Sprague-Dawley大鼠模型建立与学习记忆相关性研究：健康雄性SD大鼠96只，随机分为血管性痴呆组（n=48）、空白组

5、(n=24)及假手术对照组(n=24)，血管性痴呆组分21d、42d、60d3个亚组，每组各16只；每组匹配相对数量的正常大鼠做对照。造模成功标志：大鼠反应迟钝，行动迟缓，行走不稳，甚至有癫痫发作，头部4.7TMRI证实脑部有新发缺血梗死灶。造模成功后观察大鼠行为学改变，利用避暗试验方法记录各组大鼠实验潜伏期（Latenttime，I万方数据摘要LT）及来回穿梭次数（Escapenumber，EN），分析实验数据以及大鼠逃跑路线，研究各实验组各个时间段大鼠学习及记忆功能的变化。2.检测大鼠海马GAP-43、GDNF的表达，探讨两周因子与大鼠学习记忆的关系：避暗试验之后，大鼠单笼饲养，无

6、外界刺激无痛分批处死实验大鼠。血管性痴呆组每亚组避暗试验后于21d、42d和60d等不同时间点无痛处死大鼠，每时间点取大鼠n=16只，相应时间点假手术组以及正常对照分别取n=8只，检测GAP-43、GDNF表达。每组大鼠一半用乙醚麻醉后断头取脑，迅速取出海马组织放于冻存管中，置于液氮后再移至-80℃冰箱以备RT-PCR及Westernblot实验用，另一半经乙醚麻醉后用4%多聚甲醛灌注后取全脑放于蔗糖梯度溶液中脱水过夜，应用OTC（Sakura,USA）包埋，-80℃冰箱保存以备组织切片用。采用免疫组化、RT-PCR和westernblot等技术方法检测血管性痴呆模型大鼠海马GAP-4

7、3、GDNFmRNA及蛋白的表达，探讨与学习及空间记忆的关系。3统计学方法：应用SPSS13.5统计软件包对实验数据进行处理，所得数据以x±s表示，数据比较采用单因素方差分析，组间比较用LSD-t检验，p＜0.05为有统计学意义结果1、血管性痴呆大鼠模型制作成功后大鼠有血管性痴呆认知功能改变表现，检测大鼠脑部有新发缺血梗死灶，或脑电波可收集典型的脑电波活动模型。模型制作成功率为62.4%。空白组避暗试验结果LT为（55.00±2.73s），EN