姜黄素对tca8113细胞周期各时相的影响

《姜黄素对tca8113细胞周期各时相的影响 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、姜黄素对Tca8113细胞周期各时相的影响【摘要】目的:探讨姜黄素对Tca8113（人舌癌细胞株）细胞株的诱导分化作用及对细胞周期各时相的影响。方法:应用MTT比色法和流式细胞仪检测姜黄素对Tca8113细胞的增殖抑制率及细胞周期的改变，并通过电子显微镜观察其亚细胞结构的改变。结果:姜黄素对Tca8113细胞增殖有明显抑制作用，且呈剂量依赖性。流式细胞仪分析，G1期细胞增高，S期细胞减少，G2.M期细胞相对增多。亚细胞结构:细胞空化，核仁不规则。结论:姜黄素能够抑制Tca8113细胞增殖，阻止G1期细胞向S期的进程。S期细胞减少，G2.M期细胞增多，促进T

2、ca8113细胞凋亡。【关键词】姜黄素;细胞周期;Tca8113细胞株　　姜黄素（Curcumin）是从中药姜黄中提取的酚性色素，具有多方面的药理作用〔1〕，如抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂、抗动脉粥样硬化及抗肿瘤等。我们应用Tca8113细胞为靶点，探讨姜黄素对其增殖的细胞周期各时相的改变，旨在为舌癌治疗提供理论依据，兹将结果报告如下:　　1材料和方法　　1.1材料Tca8113细胞株，由北京医科大学口腔医院蕙赠;姜黄素购于上海化学试剂采购站（分析纯）;RPMI1640培养基、MTT（塞唑蓝）购于美国Sigma公司;胎牛血清购于长春生物制品研究所。　　1.2

3、方法　　1.2.1MTT比色法取对数生长期的Tca8113细胞。经0.25%胰蛋白酶消化，收集细胞，调细胞数为2×108.L。接种于96孔塑料培养板内，每孔100μl.孔。分别加入10、20、40g.L姜黄素，每个浓度6复孔，同时设空白对照组，共4组。培养24h，于培养结束前6h加入MTT试剂20μl.孔，终浓度为0.5g.L。继续培养6h后加入酸化异丙醇50μl.孔。振荡5min，使MTT还原产物完全溶解，用酶标仪在550波长处测定各孔吸光度A值，计算肿瘤细胞抑制率。　　肿瘤细胞抑制率=（1-加药孔细胞A值÷对照孔细胞A值）×100%　　1.2.2应用流

4、式细胞仪检测Tca8113细胞周期各时相变化及凋亡率，细胞培养及分组同1.2.1，培养结束后，胰蛋白酶消化。收集细胞，PBS洗2次，离心弃上清，用70%冷乙醇固定，上机前过4S目网，调细胞数为1×109.L，测定细胞周期各时相变化。　　1.2.3透射电镜观察Tca8113细胞亚结构改变，收集经姜黄素作用的Tca8113细胞。离心弃上清，用2.5%戊二醛固定，1%锇酸后固定。环氧树脂包埋。超薄切片，醋酸铅-铀双重染色，透射电镜观察并拍照。　　1.2.4统计学分析组间比较用t检验，数据以均数标准差（ˉx±s）表示。　　2结果　　2.1不同浓度姜黄素对Tca81

5、13细胞增殖抑制率的影响见表1。　　表1不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率的影响（略）　　表1结果表明，不同浓度姜黄素对Tca8113细胞增殖抑制率随着药物浓度的增加而升高，与对照组相比差异非常显著。　　2.2不同沈度姜黄素对Tca8113细胞周期及凋亡率的影响见表2。　　表2结果表明，随着姜黄素浓度增加，作用时间间延长，效果越明显，其凋亡率亦上升，20g.L组姜黄素对Tca8113细胞凋亡率可达11.5%。　　表2不同浓度姜黄素对Tca8113细胞周期及凋亡率的影响（略）　　3讨论　　近年来，细胞周期的研究取得令人注目的成绩，特别是细胞周期中不

6、同时相的改变为肿瘤预防和治疗提供了重要的理论依据。　　我们应用MTT比色法测定姜黄素对Tca8113细胞的增殖抑制率，结果表明。姜黄素可明显抑制Tca8113细胞增殖，与对照组相比差异非常显著，且具有时间剂量依赖性。MTT试剂可被哺乳动物活细胞中线粒体脱氢酶还原成蓝色甲颗粒，且甲生成的量与活细胞数量及细胞活化状态呈线性关系〔2〕。因此被广泛用于抗肿瘤药物的筛选。　　流式细胞仪结果显示，不同浓度的姜黄素对Tca8113细胞增殖周期均有明显影响，组间比较差异均显著，结果显示G1期细胞增多，S期细胞减少，G2.M期细胞相对增多，G1期细胞又称细胞复制前期，是指细

7、胞从有丝分裂到DNA复制之前，G1期是制造产生rRNA、mRNA、tRNA及核蛋白体，所以说G1期是细胞复制周期运行的关键，同时G1期也是药物等因素作用的敏感点〔3〕。因而抑制细胞周期的G1期的RNA及核蛋白体的合成，可间接的使肿瘤细胞的RNA合成减少，延缓肿瘤细胞的增殖。G2.M期细胞增多是细胞损伤的普遍反应，多种细胞损伤剂不仅可引起G1期细胞停滞，亦可引起G2.M期细胞阻滞〔4〕。我们的结果显示，姜黄素对Tca8113细胞G1期阻滞，G1期细胞堆积，不能进入S期，阻滞G1期细胞向S期的进程，从而使G2.M期细胞相对增多，细胞凋亡率升高。　　电子显微镜观

8、察所见，细胞肿胀、细胞核变小，细胞质高度空化。总之，根据我们的实验