儿童急性白血病生存素和细胞周期素b1基因表达

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1、儿童急性白血病生存素和细胞周期素B1基因表达【关键词】生存素基因；细胞周期素B1基因；急性白血病；逆转录聚合酶链反应　　ExpressionsofsurvivinandcyclinB1geneinchildhoodacuteleukemia【Abstract】AIM:ToinvestigatetheexpressionsandsignificanceofsurvivinandcyclinB1geneinchildhoodacuteleukemia(AL).METHODS:TheexpressionsofsurvivinandcyclinB1genei

2、nedbyRTPCRinbonemarro42childrenissiveAL(ALCR)and15alignantdiseaseasacontrolgroup.RESULTS:InincipientandrelapsedALgroups,theexpressionlevelofsurvivinarkablyhigherthanthoseincontrolgroupandALCRgroup(P<0.01).ThereRNA(P=0.025).Theexpressionofsurvivingenemunogenictype,initial2a6例

3、，M2b1例，M3a3例，M3b1例，M4b1例).初治35例，完全缓解(ALCR)13例，复发7例.初治组中ALL26例，其中BALL16例，TALL5例，5例未进行免疫分型，ANLL9例.各组性别、年龄等条件相似.对照组15（男9，女6）例，年龄3～14岁.为同期住院非恶性血液病（特发性血小板减少性紫癜、缺铁性贫血等）患儿.1.2方法Trizol试剂（Gibco公司）；逆转录酶MMLV(Promega公司)，Taq酶（Sangon公司）；PCR扩增仪（MJ公司220型）.抽取患者骨髓液1～2mL，ACD抗凝，采用Ficoll密度梯度离心分离出单个

4、核细胞(mononucleiccell,MNC)，采用Trizol试剂抽提并制备总RNA.cDNA的合成包括总RNA2μL(1g/L),oligo(dT)181.0μL，加ddH20至12μL，70℃反应5min，冰上冷却，加入5×Buffer4.0μL，RNasin核糖核酸酶抑制物1.0μL，10mmol/L的dNTPs2.0μL，37℃反应5min，加MMuLV逆转录酶(200MU/L)1.0μL，终体积20μL，42℃反应60min，70℃反应10min后冰上冷却完成反应.PCR扩增生存素上游引物：5′ACCGCATCTCTACATTCAAG3

5、′，生存素下游引物：5′CTTTCTTCGCAGTTTCCTC3′；细胞周期素B1上游引物：5′CCATTATTGATCGGTTCATGCAGA3′，细胞周期素B1下游引物：5′CTAGTGCAGAATTCAGCTGTGGTA3′；βactin上游引物：5′AAGAGAGGCATCCTCACCCT3′，βactin下游引物：5′TACATGGCTGGGGTGTTGAA3′.生存素扩增产物长度342bp，细胞周期素B1扩增产物长度585bp，βactin扩增产物长度218bp.PCR反应体系为25μL，包括逆转录产物cDNA2μL，10×PCR反应缓冲

6、液2.50μL，10mmoldNTP0.5μL，25mmol/LMgCl21.5μL，生存素（或细胞周期素B1）上、下游引物,βactin上、下游引物各1.0μL（10μmol/L），TaqDNA聚合酶(83.35mkat/L)0.2μL，其余用水补足.生存素反应条件为：94℃30s，54℃30s，74℃40s，30个循环.细胞周期素B1反应条件为：94℃60s，54.7℃60s，74℃40s，32个循环.取扩增产物在琼脂糖凝胶上电泳，有目的基因扩增片断特异性条带者的为阳性，以无模板的PCR产物为阴性对照.利用GelDoc2000系统对凝胶图像进行分

7、析，计算样本生存素，细胞周期素B1基因PCR产物条带光密度与βactinPCR产物条带光密度比值，即为生存素，细胞周期素B1基因表达水平.统计学处理：使用SPSS10.0软件包处理.生存素，细胞周期素B1基因的表达数据用中位数(P25～P75)表示，组间比较进行秩和检验，对列联表资料进行相关分析，检验水准α=0.05.2结果2.1生存素，细胞周期素B1mRNA的表达初治和复发组表达均高于对照组；缓解组和对照组表达无差异；复发组生存素表达高于初治组（图1,2），复发组细胞周期素B1表达和初治组间无差异（表1）.ANLL患者生存素mRNA表达中位数为0.

8、536，ALL为0.450，两者比较无显著性差异（P=0.853）.ANLL细胞周期素B1mRNA表达中位数