川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元bcl

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1、川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元Bcl【摘要】目的：通过免疫组织化学方法来探讨川芎嗪(TMP)对青霉素致痫大鼠大脑神经元内Bcl-XL基因表达的影响。方法：使用青霉素致痫大鼠模型,采用BL-410生物机能实验系统记录双侧大脑皮层痫样放电,待癫痫样放电稳定后,腹腔注射不同剂量的TMP,待其抑制作用最明显时,取大脑切片,采用免疫组织化学方法观察大脑神经元内Bcl-XL基因表达的变化，利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织Bcl-XL基因表达的平均光密度和平均阳性面积。结果：A组(手术对照组)与B组(青霉素致痫组)、C组(TMP10mg·kg-1治疗组)之间Bcl-XL基因

2、的平均光密度及阳性面积率有显著性差异（P＜0.01)，A组(手术对照组)与D组(TMP20mg·kg-1治疗组)、E组(TMP40mg·kg-1治疗组)之间Bcl-XL基因的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性（P＞0.05），B组(青霉素致痫组)与C组(TMP10mg·kg-1治疗组)之间平均光密度及阳性面积率的差异无显著性（P＞0.05），D组(TMP20mg·kg-1治疗组)与E组(TMP40mg·kg-1治疗组)之间Bcl-XL基因的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性（P＞0.05）。结论：TMP可抑制青霉素致痫大鼠大脑神经元的凋亡，从而对神经元起了重要的保护作用。【关键词

3、】川芎嗪癫痫放电神经元青霉素Bcl-XL基因细胞凋亡(apoptosis)是正常器官发育和组织稳态过程中一种固有的细胞死亡形式,也可由多种因素包括糖皮质激素、高温、一定的化疗药物和电离辐射等诱导产生。细胞凋亡同细胞的增殖与分化一样,离不开基因的表达与调控,目前发现许多基因参与细胞凋亡的调控,在哺乳动物细胞大致分为三类:一类为促进凋亡;另一类为抑制凋亡;还有一类为双向调控,如c-myc、Bcl-x,Bcl-x可翻译出两种蛋白Bcl-XL和Bcl-XS,前者抑制凋亡,后者促进凋亡。原癌基因和抑癌基因是参与细胞维持自稳平衡(homeostosis)的正负调控信号,共同调节细胞增殖、分化和凋

4、亡［1~3］。川芎为伞形科蒿本属植物,它具有活血化淤、疏风止痛、理气的作用［4］。川芎嗪(ligustrazine)是中药川芎的有效成分之一,属酰胺类生物碱,化学结构为四甲基吡嗪,化学结构为四甲基吡嗪(tetramethylpyrazine,TMP)。TMP可抑制海马神经元的放电活动,TMP可明显抑制吗啡依赖大鼠戒断症状及体重下降［5，6］,大剂量TMP对缺血、缺氧性脑损伤、海马CA1神经元的缺血性损伤有改善或保护作用。TMP已被广泛应用于心、脑血管闭塞性疾病的治疗。本课题采用免疫组织化学方法、图像分析技术检测了TMP对青霉素致痫大鼠大脑神经元内Bcl-XL基因表达的平均光密度及阳性

5、面积率的变化影响,并进一步探讨其作用机制。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物　　SD大鼠(由武汉大学医学院实验动物中心提供),雌雄不拘,体重200～250g。　　1.1.2实验药品及试剂　　盐酸川芎嗪注射液(批号0107001),常州制药厂生产；注射用青霉素钠(批号00109306),华北制药股份有限公司生产。　　1.1.3实验仪器　　BL-410生物机能实验系统,成都泰盟电子有限公司生产；江湾I-C型立体定向器,第二军医大学器材处生产。　　1.2方法　　1.2.1癫痫动物模型　　实验选用健康SD大鼠,用10%乌拉坦以10ml·kg-1体重腹腔注射(ip)麻醉,将动

6、物固定在江湾I-2C型立体定向器上,于大脑左、右两侧前卤后3mm,矢状缝旁开3mm行开颅手术,暴露大脑皮层记录区域(2mm×2mm),将银球电极置于左、右两侧的记录部位,信号输入置BL-410生物机能实验系统,进行左、右两侧脑电记录。用浸有青霉素溶液的明胶海绵(200u/mm3)置于左侧大脑皮层表面,诱发大鼠大脑皮层癫痫样放电,待癫痫放电稳定后,移去明胶海绵,用浸有温热生理盐水棉球盖住创口。　　1.2.2试验分组及取材　　将实验大鼠随机分为5组,每组8只:①A组(手术对照组),麻醉开颅手术1h后取大脑;②B组(青霉素致痫组),青霉素诱发癫痫1h后取大脑；③C组(TMP10mg·kg-

7、1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后,再腹腔注射(TMP10mg·kg-1),待抑制作用最明显时取大脑；④D组(TMP20mg·kg-1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后,再腹腔注射(TMP20mg·kg-1),待抑制作用最明显时取大脑；⑤E组(TMP40mg·kg-1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后,再腹腔注射(TMP40mg·kg-1),待抑制作用最明显时取大脑。　　1.2.3HE染色　　常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片(厚约4μm)及HE染色。