GB-T17999.7-1999 SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验

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1、GB/7门7999.7一1999前言血清平板凝集试验是监测鸡自痢一鸡伤寒沙门氏菌感染的常规方法，但是某些其他细菌感染后，也可出现一定的阳性反应，这就有赖于细菌分离，作为最终结果判定，为此本标准规定了SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验方法。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法本标准为《SPF鸡鸡自痢沙门氏菌检验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:GB/T17999.1-1999SPF鸡红细胞凝集抑制试验;GB/T17999.2--1999SPF74血清中和试验;GB/T17999.

2、3--1999SPF鸡血清平板凝集试验;GB/T17999.4--1999SPF9鸟琼脂扩散试验;GB/T17999.5--1999SPF鸡酶联免疫吸附试验;GB/T17999.6一1999SPF鸡胚敏感试验;GB/T17999.8--1999SPF鸡试管凝集试验;GB/T17999.9一1999SPF鸡间接免疫荧光试验本标准山中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出本标准由农业部畜牧兽医司归[1本标准起草单位:中国兽药监察所、农业部实验动物研究中心本标准主要起草人:张学琴、陈德威、赵立红中华人民共和国国家标准GB/T17999.7一19

3、99SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验SPFehiekem--ExaminationofSalmonellaPullorum1范围本标准规定了鸡白痢沙门氏菌检验所用试剂、材料，检验程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染鸡白痢一鸡伤寒沙门氏菌后的细菌分离和鉴定2原理取待检样品(肠内容物、有关脏器匀浆)接种于增菌培养基中进行增菌，然后将培养物转移到选择、鉴别培养基卜培养，挑选可疑菌落接种于营养琼脂培养基上，取培养物进行生化试验与血清学试验，以确定鸡白痢沙门氏菌与鸡沙门氏菌。3引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本

4、标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T14926.1-1994实验动物沙门氏菌检验方法GB4789.4-1994食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验4材料和试剂4.1营养肉汤培养基按GB4789.4执行。4.2改良亚硒酸氢钠增菌液(SF)按GB/T14926.1-1994中3.1的规定执行4.3DHL琼脂按GB4789.4-1994中3.19的规定执行。4.4ss琼脂按GB4789.4-1994中3.21的规定执行。4.5亚硫酸秘琼脂(BS)按GB4789.4-1994中

5、3.18的规定执行。4.6三糖铁培养基(TSl)按GB4789.4-1994中3.24,3.25的规定执行。4.7营养琼脂按GB4789.4--1994中3.7的规定执行。4.8半固体琼脂按GB4789.4-1994中3.28的规定执行。4.9糖发酵管按GB4789.4-1994中2.2的规定执行4.10蛋白陈水按GB4789.4-1994中2.13的规定执行。4-11硝酸盐培养基按GB4789.4--1994中2.17的规定执行4.12氧化酶试剂按GB4789.4-1994中2.18的规定执行。4.13WA酸脱梭酶试验培养基按GB478

6、9.4-1994中2.21的规定执行4.14尿素培养基按GB/T14926.1-1994中3.7.1的规定执行4.15革兰氏染色法按GB4789.4-1994中1.2的规定执行。4.16沙门氏菌诊断血清国家质量技术监督局1999一们一10批准2000一04一01实施GB/T17999.7-19995检验程序检验程序见图1I8h-24h图1沙门氏菌检验程序6操作步骤61采样:无菌采取有病变的卵巢、输卵管、翠丸、心包膜与心包液、胆汁、肝、脾以及小肠和盲肠6.2将HP,脾月困十、心包膜、心包液、输卵管、翠丸混合样品，放入灭菌乳钵或均浆器中研磨成

7、匀浆，加入少肚营养肉汤稀释。取此匀浆10mL接种到100mLSF增菌液中，另取匀浆10mL接种到100ML营养肉汤培养基中。采取的小肠与盲肠样品，按上述方法制成匀浆，取10mL接种到100mLSF增菌液中。分别将背养肉汤培养瓶置36'C11℃培养24h,SF增菌液培养瓶置430Ct1℃培养18h-y24ho6,3分离培养:用接种环取6.2培养物分别在SS或BS和DHL琼脂平板培养基上划线接种，置36C土]C培养24h-48h如果经24h-48h培养后未发现可疑菌落，再取增菌培养物重复划线分离培养1次。6.4挑选可疑菌落:从每块平板培养基上

8、挑选沙门氏菌疑是菌落3个~5个，分别接种在营养琼脂斜曲上，代36C士1C培养24h。鸡白痢沙门氏菌与鸡沙门氏菌的典型菌落是生长在DHL培养基上为黄褐色透明小菌落;生长在SS琼脂平板上为无色半透