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1、蒽酮硫酸法测定益元口服液中总多糖的含量【关键词】益元口服液总多糖蒽酮硫酸法含量测定Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentsofpolysaccharidesinYiyuanoralliquid.MethodsThecontentofpolysaccharideseasuredcolorimetricallybyanthronetestusingglucoseasthestandard.ResultsThecalibrationcurvel-1forgluc
2、ose.Theaveragerecoveryg·ml-1,respectively.Conclusion〖ethodple,accurateandstable,UV紫外分光光度计（美国热电），电热数字显示恒温水浴锅（上海浦东跃欣科学仪器厂），台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。1.2试药益元口服液，由南方医科大学健康食品研究所提供(批号20050208)；葡萄糖对照品，由中国药品生物制品检定所提供；蒽酮、硫酸、乙醇、丙酮、乙醚等均为分析纯。2方法与结果2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液的配制精密
3、称取葡萄糖对照品8.02mg，置于10mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，得0.802ｍｇ·mL-1的葡萄糖对照品溶液。2.1.2硫酸蒽酮试液的配制称取蒽酮50mg，置于锥形瓶中，加蒸馏水25mL溶解，然后加入硫酸75mL，即得。临用新配。2.1.3供试品溶液的制备［4-5］精密量取益元口服液1mL,加无水乙醇2mL,混匀,离心,弃去上清液；沉淀用1mL热水溶解，过滤，除去不溶物后加无水乙醇6.1mL，混匀,离心,弃去上清液，取沉淀先用sevag法脱蛋白质，再依次用无水乙醇、丙酮、乙醚
4、多次洗涤。沉淀挥干有机溶剂后，加双蒸馏水溶解并定容于100mL量瓶中。精密吸取上述稀释液1mL于10mL量瓶中,加双蒸馏水定容得供试品溶液。2.1.4阴性对照液的制备精密量取益元口服液1mL,按样品供试液的制备方法收集各次乙醇沉淀离心后待弃的上清液于烧杯中，置恒温水浴挥干乙醇至无醇味。用双蒸馏水溶解并定容于100mL量瓶中。精密吸取上述稀释液1mL于10mL量瓶中,加双蒸馏水定容得阴性对照液。2.2标准曲线的绘制精密量取葡萄糖对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL，分别置于
5、10mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。上述溶液各精密量取1mL于具塞试管中，冰水浴，精密加入硫酸蒽酮溶液4mL，然后在沸水浴中加热10min,自来水冷却，静置30min。以空白溶液为对照，在625nm波长处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度(ρ)对吸光度(A)进行线性回归，得标准曲线：ρ=0.1496A+0.0014，r=0.9994。表明葡萄糖的质量浓度在0.00802～0.06416ｍｇ·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系。2.3干扰试验将对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液按照“2.2”项下
6、的方法进行扫描。结果对照品溶液和供试品溶液在625nm处有最大吸收，而阴性对照液吸收值小于0.005，说明阴性对照液对样品的测定没有影响。见图1。2.4稳定性试验对供试品溶液及对照品溶液测定吸光度时,50min内每间隔10min测1次，结果吸光度基本保持不变，其RSD为2.81%，可见本实验方法稳定性良好。2.5重现性试验取批号为20040316的供试品，平行测定5次，结果RSD为3.2%。说明同一供试品在相同条件下测定的结果重现性好。2.7样品总多糖含量测定取3批益元口服液（批号分别为2004
7、0316，20040509，20040711），分别量取1.00mL各3份,照“2.1.3”项下的方法制成供试品溶液,量取1mL,按“2.2”项下的方法测定吸光度,按标准曲线方程计算样品中总多糖的含量（以葡萄糖表示）,得3批制剂的总多糖平均含量分别为9.81，10.16，9.66ｍｇ·mL-1。3讨论3.1本制剂总多糖含量最初采用滴定法进行测定，因样品中的多种物质会与滴定液反应，故灵敏度不高。蒽酮硫酸比色法测定总多糖的含量是经典的方法之一，文献报道可得到理想的结果［7］。本实验采用蒽酮硫酸法，原
8、理是样品在强酸作用下脱水生成糖醛或其衍生物后，与特异性显色剂蒽酮迅速而完全地缩合成稳定的有色物质,其生成量与总多糖含量存在定量关系,灵敏度高且快速，可以作为该制剂生产时质量控制的方法。3.2蒽酮硫酸法是非特异性的，可能受到其他可与蒽酮试剂反应的物质干扰。在制备供试液时，可用67%(体积分数）乙醇提取1次，再用85%（体积分数）乙醇沉淀除去人参、黄芪等药材中含有的皂甙、单糖和绝大部分的低聚糖，减少水溶性糖类对含量测定的影响。由于蛋白质加热水解产物对蒽酮硫酸法测定总多糖的含量的干扰也很大，从供试液中
