猪瘟活疫苗（兔源）组织毒生产及其贮存方法比较研究

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1、猪瘟活疫苗（兔源）组织毒生产及其贮存方法比较研究鲁立柱/新疆农业大学动物医学学院王燕平/新疆天康畜牧生物技术股份有限公司制药事业部我国自1956年开始推广猪瘟兔化弱毒疫苗时，首先是取家兔的淋巴结和脾组织就地制造的湿苗，随制随用。1958年研制成功冷冻干燥疫苗，适用于工厂化生产，时至今日仍然采用相同的生产工艺，猪瘟脾淋苗以其抗原性好，过敏率低，免疫后快速产生免疫力等优点深受广大养殖户的喜爱，但其组织毒生产工艺繁琐，人员工作量大，综合成本高等诸多缺点也限制了其产量。通过对生产经验的总结，从降低测温次数、提高组织收获量、增加组织保存期限三方面着手，降低

2、生产成本，提高组织毒生产安排的灵活性，以达到保证产品质量的基础上有效提高疫苗产量的目的。一、材料与方法1.材料。猪瘟病毒：猪瘟兔化弱毒，F0代猪瘟兔化弱毒（C株）冻干种毒购自中国兽药监察所提供；脾淋组织毒由本公司猪瘟生产组提供。试剂：注射用水，由本厂制水站提供；灭菌生理盐水、Hankacute;s液、5%蔗糖脱脂牛奶和猪瘟耐热保护剂等自行配制，消毒后备用。实验动物：体重为2.0～2.5kg健康的纯系加利福尼亚兔，未注射过兔瘟疫苗，基础体温应在39.3℃～39.7℃之间，且波动小于0.5℃，由新疆鄯善县绿洲兔业养殖场提供。2.方法。（1）生产病毒最

3、佳接种量和收毒部位的确定方法。先将冻干毒种用灭菌生理盐水制成50倍稀释的乳剂，耳静脉注射家兔6只，每只1ml。注射后按照规程规定的效力检验方法，选取热型反应为定型热的家兔3只，在温度下降后24h内剖杀，以无菌手术采取家兔肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结，采毒时切勿剪破胃、肠、食道，以免污染。然后，将收获的组织分别碾磨，用灭菌生理盐水稀释成1×10-4、2×10-4、3×10-4兔体感染量/克的乳剂，耳静脉注射家兔2只，每只1ml，按照规程规定的效力检验方法判定家兔热型。（2）组织毒使用不同保护剂在不同温度下的保存期试验方法。将制备的兔瘟组织毒

4、，称重，研磨，平均分成四份，分别使用灭菌生理盐水、Hankacute;s液、5%蔗糖脱脂牛奶和猪瘟耐热保护剂制备成10倍稀释的乳剂。再以2.0×10-4兔体感染量/克作为实验标准，将各组试验样用灭菌生理盐水稀释成2.0×10-4兔体感染量/克的乳剂，各组试验样分别置于-70℃、-15℃、2℃～8℃环境贮存，于7日、30日、60日、90日、120日、150日分别耳静脉注射家兔2只，每只1ml。按照规程规定的效力检验方法判定热型反应，检查各试验样的基础病毒含量是否≤2.0×10-4兔体感染量/克。二、结果1．脾脏、肝脏、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结组织生

5、产病毒的收率比较。实验兔脾脏平均重量在2～3g，在腹腔内胃大弯部，易于收获，且无其它组织粘连，收获中也不易产生污染，各方面条件都适用于组织苗的生产。肝脏质量大，平均在80～120g是脾脏的2～40倍，而且收获容易，不易造成污染，重量大是其最大的优势，肠系膜淋巴结在腹腔内肠系膜中心位置，其平均重量在4～5g，被大量脂肪组织包围，收获时不易剥离，不小心容易剪破肠道造成污染。颌下淋巴结位于皮肤与下颌骨之间，平均重量为0.3～0.5g，体积过小收获时不易剥离，而且在宰杀兔子时，放血过程中容易切破此部位造成污染。表略2.各组织不同稀释度热型反应判定结果。按

6、照规程效力检验的方法，检测脾脏、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结的病毒含量，经热型判断，结果良好，达到了生产要求的配苗标准，脾脏病毒含量最高，肠系膜淋巴结和颌下淋巴结稍低于脾脏，肝脏的病毒含量未达到生产配苗的要求。表略3.各种保护剂保存的组织毒在不同温度下保存7日、30日、60日、90日、120日、150日后的病毒含量保持情况。根据病毒含量测定结果，生理盐水和Hank’s液保存的组织，只有在-70℃时能够维持组织病毒含量到150日以上。-15℃保存组织，生理盐水保存的组织病毒含量会迅速降低，Hank’s保存的组织病毒含量可以维持到60日，仍能达到配苗要求

7、。猪瘟耐热保护剂和5%蔗糖脱脂牛奶保存的组织病毒在冷冻保存下，保存时间能够到达150d以上。2℃～8℃冷藏保存，5%蔗糖脱脂牛奶保存的组织在第7日时病毒含量就已经不符合配苗要求了，猪瘟耐热保护剂保存的组织可以维持到120d以上。表略4.四种保护剂优缺点对比。对四种保护剂从保存效果和经济性、实用性方面对比分析，5%蔗糖脱脂牛奶，最适合在生产中使用，生理盐水和Hankacute;s液虽然经济实惠，操作方便，对配苗影响也不大，对组织毒的保存效果不理想，不能达到长期保存组织毒的目的，猪瘟耐热保护剂，对组织病毒含量保存的很好，但价格较高，且容易凝固影响配苗

8、，所以在生产中不便于使用，5%蔗糖脱脂牛奶，保存效果良好，其本身就是冻干保护剂，对于产品后期配苗冻干过程无影响。表略三、讨论猪瘟活疫苗(