二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸对对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响

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1、二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸对对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响郭凯,胡华碧,陈琳,魏冀,马慧【摘要】目的:研究二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响。方法:将30只健康SD大鼠随机分为地面对照组(Ⅰ)、悬吊对照组(Ⅱ)和悬吊实验组(Ⅲ)。悬吊实验组鼠料中添加DHA、EPA,其他2组为普通鼠料。悬挂40d后利用激光衍射法测定红细胞变形指数、取向指数,荧光偏振法测定红细胞膜流动性,硫代巴比妥酸荧光法测定红细胞膜脂质过氧化物(LP0),激光共聚焦显微镜观测红细胞纤维型肌动蛋白的改变及含量。结果:失重

2、下大鼠红细胞的变形指数、取向指数以及红细胞膜的流动性明显降低(P0.05),LPO增加,红细胞形态和骨架发生改变,Factin含量明显降低(P0.05)。结论:在模拟失重条件下,红细胞膜流动性降低,DHA、EPA可拮抗损伤作用,对红细胞膜具有较强的保护作用。【关键词】二十二碳六烯酸;二十碳五烯酸;模拟失重;红细胞膜;膜流动性二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)是n3多不饱和脂肪酸,对于稳定细胞膜的结构和功能、提高机体抗氧化能力有着十分重要的意义[1]。研究证明,自由基可通过脂质过氧化引起生物膜质分子结构改变,使生物膜流动性

3、下降[2]。我们通过观察失重条件下大鼠红细胞膜流动性的改变,探讨DHA、EPA对细胞膜流动性的影响,证实多不饱和脂肪酸是否对微重力条件下的机体代谢有影响。　　1材料和方法　　1.1材料雄性SD大鼠30只,体质量(160.6±9.8)g。购于贵阳医学院实验动物中心。DHA、EPA胶囊由威海达因海洋生物制药有限公司提供,含量为450mg/粒,含DHA、EPA70%。每斤普通鼠料中加3粒DHA、EPA胶囊。所有动物均饮普通自来水。LBYBX2型激光衍射仪(北京普利生仪器中心);Hitachi850型荧光分光光度计(日本日立公司);激光扫描共聚

4、焦显微镜(德国Leika公司);GL16G高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。1,5二苯基1,3,5己三烯(DPH,Fluka公司);硫代巴比妥酸(德国Merk公司);罗丹明标记的鬼笔环肽(MolecularProbes公司);TritonX100(美国Sigma公司);聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP,MFU)[4]。　　1.2.4红细胞膜LPO含量测定取红细胞膜悬液测定红细胞膜LPO含量[5]。　　1.2.5激光共聚焦显微镜观察红细胞骨架离心收集2×106细胞,用PBS洗2次(1000r/min,5min),弃上清。200μL含3

5、7g/L甲醛的PBS固定细胞,室温放置15min,用PBS洗2次(1000r/min,5min),弃上清。用含1g/LTritonX100的PBS悬浮细胞,室温放置5min。用PBS洗2次(1000r/min,5min),弃上清。将细胞重新悬浮在200μL含10g/LBSA的PBS中,室温放置30min,用PBS洗两次(1000r/min,5min),弃上清。200μLPBS重新悬浮细胞,加入10μL罗丹明标记的鬼笔环肽(200μL/mL,溶于甲醇中),混匀,室温,避光静止20min。用PBS洗1次(1000r/min,5min),弃上

6、清,将细胞重悬在50μL的PBS中,在4℃避光保存样品。用双面胶在载玻片上做成井状的小室,将细胞悬液滴加在小室内,放盖玻片,在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架并检测其荧光强度[6]。　　1.3统计学分析统计分析采用SPSS10.0软件。样本均数比较用t检验、方差分析及q检验。P0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1红细胞DI、IDI、OI的改变与Ⅰ组比较,Ⅱ组大鼠红细胞DI、IDI、OI的变化没有统计学差异(P>0.05),而Ⅱ组与二者的差异明显(P0.05,图1)。　　2.2红细胞膜流动性测定与Ⅱ组相比,悬吊实验组红细胞膜

7、偏振度(polarigatis,P)显著减小,MFU显著增大,红细胞膜LPO相对减少(P0.05),表明实验组红细胞膜流动性显著大于悬吊对照组,红细胞膜流动性的增加与LPO的减小有关,与地面对照组之间无统计学差异(表1)。表1红细胞膜流动性测定结果　　2.3红细胞膜型肌动蛋白表达及含量在正常生理状态下的红细胞骨架主要聚集在红细胞膜下,荧光显微镜下可见膜下有一个明显环,胞分布量很少。Ⅱ组大鼠红细胞骨架的完整性明显破坏,在膜下并未形成完整的环,胞质含量增多,并且分布不均匀(图2)。Ⅱ组大鼠红细胞的荧光强度显著降低(P0.05)。Ⅰ组的平均荧光

8、强度为185±21,Ⅱ组为120±26,Ⅲ组为181±22,Ⅱ组与Ⅰ组、Ⅲ组比较,纤维型肌动蛋白的含量明显减少(P0.05)。图2大鼠红细胞骨架激光共聚焦扫描图像(×400)　　A:Ⅰ;B:Ⅱ