二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸对对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响

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1、二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸对对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响作者：郭凯,胡华碧,陈琳,魏冀,马慧【摘要】目的:研究二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)对模拟失重大鼠红细胞膜流动性的影响。方法:将30只健康SD大鼠随机分为地面对照组(Ⅰ)、悬吊对照组(Ⅱ)和悬吊实验组(Ⅲ)。悬吊实验组鼠料中添加DHA、EPA,其他2组为普通鼠料。悬挂40d后利用激光衍射法测定红细胞变形指数、取向指数,荧光偏振法测定红细胞膜流动性,硫代巴比妥酸荧光法测定红细胞膜脂质过氧化物(LP0),激光共聚焦显微镜观测红细胞纤维型肌动蛋白的改变及含量。结果:失重下大鼠红细胞的变形指数、取向指数以及

2、红细胞膜的流动性明显降低(P<0.05),LPO增加,红细胞形态和骨架发生改变,Factin含量明显降低(P<0.05)。结论:在模拟失重条件下,红细胞膜流动性降低,DHA、EPA可拮抗损伤作用,对红细胞膜具有较强的保护作用。【关键词】二十二碳六烯酸;二十碳五烯酸;模拟失重;红细胞膜;膜流动性二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)是n3多不饱和脂肪酸,对于稳定细胞膜的结构和功能、提高机体抗氧化能力有着十分重要的意义[1]。研究证明,9自由基可通过脂质过氧化引起生物膜质分子结构改变,使生物膜流动性下降[2]。我们通过观察失重条件下大鼠红细胞膜流动性的改变,

3、探讨DHA、EPA对细胞膜流动性的影响,证实多不饱和脂肪酸是否对微重力条件下的机体代谢有影响。　　1材料和方法　　1.1材料雄性SD大鼠30只,体质量(160.6±9.8)g。购于贵阳医学院实验动物中心。DHA、EPA胶囊由威海达因海洋生物制药有限公司提供,含量为450mg/粒,含DHA、EPA70%。每斤普通鼠料中加3粒DHA、EPA胶囊。所有动物均饮普通自来水。LBYBX2型激光衍射仪(北京普利生仪器中心);Hitachi850型荧光分光光度计(日本日立公司);激光扫描共聚焦显微镜(德国Leika公司);GL16G高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。1,5二苯基1,3,

4、5己三烯(DPH,Fluka公司);硫代巴比妥酸(德国Merk公司);罗丹明标记的鬼笔环肽(MolecularProbes公司);TritonX100(美国Sigma公司);聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP,MW=30kD,德国进口分装);150g/LPVP溶液(PVP15g,Na2HPO4284mg,KH2PO468mg,NaCl0.38g,溶于100mL蒸馏水中,用100mL/LNaOH调pH值至7.4,黏度为15map·s,300mOsm)。30g/LPVP溶液(150g/LPVP溶液与等渗PBS溶液1∶4混合,黏度1.02map·s)。　　1.2方法9　　1.2.1动物分

5、组将以上动物随机分为3组,每组10只:I组为地面正常对照组;Ⅱ组为悬吊对照组;Ⅲ组为悬吊实验组。采用尾部悬吊法模拟失重,大鼠后肢离地,躯干与地面成30°夹角,前肢可自由活动。悬吊时间为40d。对照组饲正常鼠料,实验组鼠料加DHA,EPA。　　1.2.2血液流变学指标测定取全血20μL加入2.5mL150g/LPVP溶液中,用传统激光衍射法[3]在剪切率为50～1000s-1下,利用LBYN6A型红细胞变形聚集仪测红细胞的变形指数(deformationindex,DI)和积分变形指数(integratedformationindex,IDI);取全血12.5μL加入2.5mL3

6、0g/LPVP溶液中,用新型激光衍射法[3]在剪切率为50～150s-1下,用LBYBX2型激光衍射仪测红细胞的取向指数(orientationindex,OI)。　　1.2.3红细胞膜流动性测定取血后,肝素抗凝,离心,取沉淀部分用低渗Tris缓冲液(10mmol/L,pH7.4)破膜40min,25000r/min4℃离心40min去上清,用低渗Tris在上述离心条件下反复清洗沉淀物数遍,直至变为乳白色,再用90g/LNaCl于4℃,50000r/min离心60min,清洗沉淀物,去除上清后,得到红细胞血影。DPH溶解在四氢呋喃中配制成2×10-3mol/L储存液,实验前用p

7、H7.4,0.01mol/LPBS稀释成2×10-6mol/L应用液,取已制备好的样品19mL(蛋白含量0.3～0.6g/L)加入3mLDPH应用液,混匀,25℃温育30min,3000r/min,离心10min,用PBS洗1次,最后悬浮于4mLPBS中待测。荧光分光光度计光源150W氢灯、狭缝10nm、激发波长359nm、发射波长430nm,在25℃下分别测定与激发光、偏振光振动方向平行、垂直时的荧光偏振强度,然后按文献[4]中公式计算出P值。再应用Einstein硬粒子溶液粘