木蹄层孔菌乙醇提取物体内抗肿瘤活性及其对荷瘤鼠免疫功能的影响

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1、木蹄层孔菌乙醇提取物体内抗肿瘤活性及其对荷瘤鼠免疫功能的影响【关键词】木蹄层孔菌；抗肿瘤活性；免疫功能Abstract:ObjectiveTostudytheanti-tumoreffectofethanolextractofFomesfomentarius(EEF)invivoanditsinfluenceonimmunologicalfunction.MethodsICRmicecarryingS180saraor-inhibitoryrate,spleenindex,thymusindex,theabilityofspleniclymphocytetransformati

2、on,theformationofantibodyinspleniccellsandtheactivityofNKcellsg·kg-1·d-1edicinecouldalsoobviouslyenhancethespleenindex,promotethespleniclymphocytetransformation,theantibodyformationinspleniccellsandtheactivityofNKcells.ConclusionExtractofFomesfomentariushasobviousanti-tumorabilityinvivo.Keye

3、sfomentarius;anti-tumoractivity;immunologicalfunction木蹄层孔菌（Fomesfomentarius）是多孔菌科的一种大型药用真菌。子实体马蹄型，为民间抗癌药物，味微苦，性平，消积化瘀。子实体水煎服，可用于治疗食管癌、胃癌、子宫癌、小儿积食［1］。对该药的药理活性过去仅限于对其水提物的报道，尚未见深入研究的报道。本实验用木蹄层孔菌乙醇提取物（ethanolextractofFomesfomentarius，EEF）作用于体内的肿瘤细胞，旨在探讨EEF的体内抑瘤活性及其对荷瘤鼠免疫功能的影响。中草药的天然产物中存在着广泛的生物活性

4、物质，如何从中草药中寻找毒副作用小，作用独特的抗肿瘤药物及抗肿瘤辅助药物［2］，发挥我国传统中药的优势将为肿瘤的治疗另辟蹊径，木蹄层孔菌作为传统的民间抗癌药物在肿瘤治疗方面有广阔的前景，值得深入研究。本实验旨在为这一传统药物的开发提供理论依据。1材料和方法1.1实验材料1.1.1药品和试剂木蹄层孔菌（购自大连王力商行）碾碎用无水乙醇煮沸浸提2～3次，过200目滤网，所得浸膏冷冻干燥，得棕色粉末。临用前将粉末先溶于少量乙醇，再加吐温-80助溶，后用蒸馏水稀释到所需浓度；用于体外实验药物用1%DMSO+完全RPMI-1640培养基稀释。新生小牛血清购自美国Hyclone公司，胰蛋白

5、酶购自上海华美公司，噻唑兰（MTT）、二甲基亚枫（DMSO）、DNaseⅠ、RNase、刀豆蛋白A(ConA)为Sigma公司产品，环磷酰胺（江苏连云港恒瑞制药厂）。1.1.2实验动物及肿瘤细胞株清洁级ICR鼠，雌雄各半，18～22g；S180腹腔积液瘤种鼠（购自中国医学科学院协和医科大学药物研究所），Hela细胞株购自军事医学科学院病毒研究所。1.1.3主要设备CO2培养箱（SHELBA）、酶联免疫检测仪（Bio-RAD公司）、离心机（上海飞鸽离心机厂）、分析天平（Sartorius）、722可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，FACSCalibur型流式细胞仪（Be

6、ctonDickinson）。1.2实验方法1.2.1体内抗肿瘤实验及对免疫器官的影响参照文献［3］，无菌抽取接种7～8天的S180荷瘤鼠腹腔积液，用灭菌生理盐水稀释成1.0×107个/ml肿瘤细胞悬液，以每鼠0.2ml接种于健康ICR鼠右后肢皮下腹沟处，24h后随机分为EEF大剂量组（500mg·kg-1·d-1）、中剂量组（250mg·kg-1·d-1）、小剂量组（100mg·kg-1·d-1）、环磷酰胺阳性对照组（30mg·kg-1·d-1）、模型组及正常对照组,每组10只。于每日同一时间灌胃给药，连续10天，末次给药后24h，摘眼球放血处死小鼠，剥离瘤块，摘取脾脏、胸腺

7、，电子天平称重，计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数。肿瘤生长抑制率=(1-实验组平均瘤重/模型组平均瘤重)×100%［4］。1.2.2荷瘤鼠淋巴细胞转化实验参照文献［5］，ICR鼠接种、分组和给药同1.2.1，末次给药后24h，无菌取出脾脏，制成5.0×106/ml脾细胞悬液，每孔1ml于24孔板中，分2孔，一孔加ConA（终浓度5μg/ml），另一孔不加。置于5%CO2、37℃培养72h，结束培养前4h每孔轻轻吸取上清液0.7ml，补加0.7ml不含FCS的RMPI-1640，同时加5g/LMT