rcs大鼠视网膜色素变性过程中相关细胞因子表达

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1、RCS大鼠视网膜色素变性过程中相关细胞因子表达【摘要】目的观察视网膜色素变性过程中，视网膜外节层内组织细胞肿瘤坏死因子α(TNF?α)、神经组织蛋白S?100、细胞间黏附分子?1(ICAM?1)的表达情况，探讨其在视网膜色素变性过程中的作用及意义。方法出生后25d的RCS大鼠10只，雌雄不限，12h光照?12h黑暗循环条件下饲养；以同龄SD大鼠10只作正常对照。苏木精?伊红染色和免疫组化法检测视网膜外节等范围内组织细胞TNF?α、S?100、ICAM?1等细胞因子的表达情况。结果RCS大鼠视网膜组织中TNF?α阳性表达强

2、于SD大鼠，ICAM?1和S100阳性表达弱于SD大鼠。结论上述细胞因子的变化可能与视网膜色素上皮细胞对视细胞外节盘膜的吞噬、消化功能的改变有关。【关键词】视网膜炎,色素性；肿瘤坏死因子α；细胞黏附分子；S100蛋白质类；大鼠视网膜色素变性为遗传性疾病，其基本病理过程已在有原发性视网膜色素变性的RCS大鼠视网膜中得到证实[1～3]。RCS大鼠视网膜色素变性过程中，色素上皮细胞对视细胞外节盘膜的吞噬、消化功能的丧失以及盘膜崩解物的残留，有可能会引发相关细胞特性的改变，进而加速了视网膜色素变性的进程。本文对RCS大鼠视网膜色

3、素变性过程中，视网膜外节等范围内组织细胞肿瘤坏死因子α(TNF?α)、神经组织蛋白S?100、细胞间黏附分子?1(ICAM?1)的表达情况进行观察，以探讨其在视网膜色素变性过程中的作用及意义。　　1材料和方法　　1.1实验动物　　出生后25d的RCS大鼠10只，雌雄不限，12h光照?12h黑暗循环条件下饲养。以同龄SD大鼠10只作正常对照。　　1.2主要实验试剂　　兔抗鼠ICAM?1抗体、兔抗鼠TNF?α抗体、兔抗鼠S100抗体、羊抗兔二抗免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。　　1.3实验标本采取　　水合氯醛

4、（400mg/kg）腹腔麻醉动物后，取出眼球，生理盐水冲洗后立即放入40g/L多聚甲醛中固定6h，去除眼前节及玻璃体，常规石蜡包埋，沿眼球矢状面连续切片，切片厚度5μm。　　1.4免疫组化阳性细胞的观察和分析　　使用OLYMPASBX?50多功能显微镜，选取不同的视野观察并照相。运用Sampl?PCI显微图像分析系统测定视网膜外节层内组织细胞内免疫反应产物的平均吸光度值。在每张切片上随机选出两个视野进行计算机显微图像分析，测得其平均吸光度值。结果以±s表示，所得数据应用SPSS10.0统计学软件进行t检验。　　2结果　　

5、2.1苏木精?伊红染色检查　　正常SD大鼠出生25d后，视网膜结构基本接近成熟状态，视杆层排列整齐，外节未见明显的紊乱及空泡现象；与SD大鼠相比，RCS大鼠出生25d后视网膜视杆层厚度增加，内节变窄，外节增厚，有排列紊乱及空泡现象。　　2.2ICAM?1免疫组化染色检测　　无论正常SD大鼠还是RCS大鼠，在视网膜组织中均可见ICAM?1阳性表达细胞，以膜表达为主，呈弥漫分布。RCS大鼠ICAM?1的平均吸光度值为0.04785±0.00612，而SD大鼠为0.05490±0.00421，RCS大鼠平均吸光度值低于RCS大

6、鼠，差异有显著性（t=3.213，P<0.05）。　　2.3S100免疫组化染色检测　　无论正常SD大鼠还是RCS大鼠，在视网膜组织中均可见S100阳性表达细胞。RCS大鼠S100平均吸光度值为0.06114±0.00352，SD大鼠平均吸光度值为0.14625±0.00382，RCS大鼠平均吸光度值低于RCS大鼠，差异有显著性（t=4.112,P<0.05）。　　2.4TNF?α免疫组化染色检测　　无论正常SD大鼠还是RCS大鼠，在视网膜组织中均可见到TNF?α阳性表达细胞。RCS大鼠TNF?α平均吸光度值

7、为0.14820±0.00235,SD大鼠平均吸光度值为0.09603±0.00238,RCS大鼠平均吸光度值高于RCS大鼠，差异有显著性（t=4.056，P<0.05）。　　3讨论　　原发性视网膜色素变性的发生，主要由于视网膜色素上皮细胞对视细胞外节盘膜的吞噬、消化功能衰退，致使盘膜崩解物残留、堆集形成一层障碍物，妨碍营养物质从脉络膜到视网膜的转运，从而引起视细胞的进行性营养不良及逐渐变性和消失。至于色素上皮细胞吞噬消化功能衰竭的原因，目前还不清楚，可能与基因异常、某种或某些酶的缺乏有关。在免疫学方面，近年研究结

8、果显示本病病人体液免疫、细胞免疫均有异常，玻璃体内有激活的T细胞、B细胞与巨噬细胞，视网膜色素上皮细胞表达HLA?DR抗原。这些证据提示RCS大鼠视网膜色素变性过程中，色素上皮细胞对视细胞外节盘膜的吞噬、消化功能的丧失以及盘膜崩解物的残留，有可能会引发相关细胞特性的改变，进而加速了视网膜色素变性的进程。临床上常见的包