乳腺癌及癌旁组织中vegf及survivin2

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1、乳腺癌及癌旁组织中VEGF及survivin2【摘要】目的：观察乳腺癌及癌旁组织中VEGF及survivin2BmRNA表达情况，并探讨其与临床病理学指标的关系.方法：以逆转录聚合酶链反应（RTPCR）法检测60例乳腺癌及癌旁5cm正常乳腺组织标本VEGF及凋亡抑制因子survivin剪接体survivin2BmRNA表达，半定量分析电泳结果.结果：在60例乳腺癌标本中VEGF及survivin剪接体survivin2BmRNA均高表达，与癌旁正常乳腺组织中差异有统计学意义（P<0.01）,VEGFmRNA及survivin

2、2B在乳腺癌组织中的高表达呈正相关（r=0.576,P<0.05），同时VEGF及survivin2BmRNA的表达与淋巴结转移有关（r=0.482，P<0.05）.结论：VEGF及survivin2B因子为乳腺癌发生、发展过程中的重要因子，可对患者的治疗及预后作预测.【关键词】乳腺肿瘤基因血管内皮生长因子类Survivin0引言随着人民生活水平的提高，生活环境的变化及各种影像学检查的完备，乳腺癌检出率逐步提高,近年来其发病率呈明显上升趋势，已列为女性恶性肿瘤的首位.如何尽早发现乳腺病变成为目前重要的研究课题.肿瘤的发生和发展是

3、一个多基因和环境因素参与的过程，研究证实肿瘤的生长有赖于血管向其提供充足的营养，为其细胞增殖、侵袭和转移提供必要的物资条件.survivin2B是近年来发现的Survivin［抗凋亡因子，凋亡抑制家族（IAP）中的新成员］的剪接体，是survivin中最具特异性因子［1］.我们采用RTPCR检测乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中VEGF及survivin2B的扩增情况，与临床病理学指标对比分析，以探讨VEGF及survivin2B与乳腺癌浸润和转移的关系.1材料和方法1.1材料我院200205/200803乳腺癌患者切除的癌组织及距肿瘤5c

4、m的癌旁非癌乳腺组织标本，能进行随访并经病理证实为乳腺癌的石蜡包埋组标本60例，均为女性，术前均未行化疗、放疗和内分泌治疗.患者年龄25～68（平均48）岁.Ⅰ期11例，Ⅱ期39例，Ⅲ期10例.原位癌38例，有腋窝淋巴结转移的22例.行乳腺癌根治术12例，改良根治术48例.Trizol试剂盒（美国Invitrogen公司），MMLV逆转录酶，RNAsin和GotaqGreenMasterMix均购自美国Promega公司.引物由上海生工公司合成.梯度PCR仪及凝胶成像系统QuantityOneVersion4.6.3（美国BioRad公司）

5、.1.2方法VEGF上游引物5′GGAGCTTCAGGACATTGCTGTG3′，下游引物为5′GGAGGAAGGTCAACCACTCAC3′,扩增片段353bp,由于survivin共有5条条带，故设计引物控制能出现的条带为survivin及其剪接体survivin△Ex3,survivin2B3条条带，共有上游引物为5′GAGAACGAGCCAGACTTGGC3，下游引物为5′CCTCTGGTGCCACTTTCAAGA3′，扩增片段461bp，344bp，530bp.GAPDH上游引物为5′AGTCCACTGGCGTC

6、TTCAC3′，下游引物为5′GCTTGACAAAGTGGTCGTTGAG3′;扩增片段639bp.用Trizol试剂提取乳腺癌、癌旁组织总RNA.RNA纯度A260/A280均在1.8～2.0之间.RT反应体系：模板RNA2μg，OligodT180.5μg，70℃变性5min,冰上冷却5min，加入5×RT缓冲液5μL,dNTPs1.25μL(each10mmol/L),RNasin416.75nkat,MMLV3334nkat，1mL/LDEPC水补至反应终体积25μL，42℃反应60min，72℃反应15min，合成的cDNA

7、置-20℃保存.PCR反应体系：在反应体系25μL中GotaqGreenMasterMix12.5μL，上下游引物各0.8μmol/L，cDNA1.5μL，NucleaseFreein，95℃30s，56℃30s，72℃30s，共40个循环，72℃延伸5min.取10μLPCR产物在含有溴化已锭的10g/L琼脂糖凝胶上电泳，5V/cm，在凝胶成像系统下成像分析.将GAPDH条带的吸光度值定为10，取目的基因条带与GAPDH条带吸光度值的比值作为目的基因的相对值.统计学处理：采用秩和检验方法，用SPSS11.5统计软件进行统计学分析.2结果2.

8、1乳腺癌组织与癌旁5cm正常乳腺组织中VEGF，survivin2B转录情况由于survivin2B及survivin△Ex3均为Survivi