微生物学检验基本技术!!

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1、1．葡萄糖代谢类型鉴别试验（O/F或Hugh－Leifson，HL）下层：蛋白胨    1克            氯化钠    0．5克        葡萄糖    0.2克         水       100毫升1.6%溴甲酚紫(Bromocresolpurple)乙醇溶液0.1-0.2mLPH=7.6注意:调完pH值后再加葡萄糖.(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而

2、氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。(2)方法：挑取少许纯培养物（不要从选择性平板中挑取）接种2支HL培养管中，在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以隔绝空气（作为密封管），另一管不加（作为开放管）。置30℃孵箱孵育48h以上。(3)结果：两管培养基均不产酸（颜色不变）为产碱型；两管都产酸（变黄）为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。(4)应用：主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。

3、肠杆菌科、弧菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于鉴别葡萄球菌（发酵型）与微球菌（氧化型）。2.氧化酶试验(1)原理：氧化酶又称细胞色素氧化酶，是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。此酶并不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。因此，本试验结果与细胞色素C的存在有关。(2)方法：取洁净滤纸条，沾取菌落少许，加氧化酶试剂（10g/L盐酸四甲基对苯二胺水溶液或10g/L盐酸二甲基对苯二胺水溶液）1滴，1min内观察结果。也可将试剂滴加到菌

4、落上进行试验。(3)结果：阳性者立即变粉红色，5-10s内呈深紫色。无色为阴性。(4)应用：用于奈瑟菌属的菌种鉴定，该属细菌均阳性。此外，也用于气单胞菌和假单胞菌属与肠杆菌科细菌的区别，气单胞菌和假单胞菌属为阳性，而肠杆菌科细菌阴性。莫拉菌属、产碱杆菌属等均为阳性。注意事项： ①试验时应避免接触含铁物质，以免出现假阳性。②10g/L盐酸四甲基对苯二胺或10g/L盐酸四甲基对苯二胺水溶液为无色溶液，在空气中易被氧化而失效，故应经常更换新试剂，并盛于棕色瓶中，若试剂已变成深蓝色，应弃去不用。1．葡萄糖代谢类型鉴别

5、试验（O/F或Hugh－Leifson，HL）下层：蛋白胨    1克            氯化钠    0．5克        葡萄糖    0.2克         水       100毫升1.6%溴甲酚紫(Bromocresolpurple)乙醇溶液0.1-0.2mLPH=7.6注意:调完pH值后再加葡萄糖.(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中

6、则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。(2)方法：挑取少许纯培养物（不要从选择性平板中挑取）接种2支HL培养管中，在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以隔绝空气（作为密封管），另一管不加（作为开放管）。置30℃孵箱孵育48h以上。(3)结果：两管培养基均不产酸（颜色不变）为产碱型；两管都产酸（变黄）为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。(4)应用：主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。肠杆菌科、弧菌科细菌为

7、发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于鉴别葡萄球菌（发酵型）与微球菌（氧化型）。2.氧化酶试验(1)原理：氧化酶又称细胞色素氧化酶，是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。此酶并不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。因此，本试验结果与细胞色素C的存在有关。(2)方法：取洁净滤纸条，沾取菌落少许，加氧化酶试剂（10g/L盐酸四甲基对苯二胺水溶液或10g/L盐酸二甲基对苯二胺水溶液）1滴，1min内观察结果。也可将试剂滴加到菌落上进行试验。(3)结

8、果：阳性者立即变粉红色，5-10s内呈深紫色。无色为阴性。(4)应用：用于奈瑟菌属的菌种鉴定，该属细菌均阳性。此外，也用于气单胞菌和假单胞菌属与肠杆菌科细菌的区别，气单胞菌和假单胞菌属为阳性，而肠杆菌科细菌阴性。莫拉菌属、产碱杆菌属等均为阳性。注意事项： ①试验时应避免接触含铁物质，以免出现假阳性。②10g/L盐酸四甲基对苯二胺或10g/L盐酸四甲基对苯二胺水溶液为无色溶液，在空气中易被氧化而失效，