产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶基因型的

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1、产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶基因型的【摘要】目的探讨产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶(extendedspectrumβlactamases，ESBLs)类型及耐药机制。方法采用纸片琼脂扩散法筛选36株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs菌株，接合传递实验、质粒谱分析、PCR检测耐药基因和DNA序列分析产ESBLs菌株的表型和基因型。结果双纸片扩散法证明有2株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs，美国株E.coli5nonO157:H7和中国株E.coli27O157:H7对头孢他啶等第三、第四代头孢菌素和氨基糖苷类抗生素耐药，并能通过5.8kb的质粒传递给受

2、体菌。PCR检测含有blaTEM基因。DNA同源分析表明861bp的blaTEMDNA片段与blaTEMIDNA片段同源。结论产志贺毒素大肠埃希菌美国株和中国株产生相同类型的ESBLs，表现出对第三、第四代β内酰胺酶类抗生素耐药。【关键词】产志贺毒素大肠埃希菌超广谱β内酰胺酶基因型StudyonthegenotypeofextendedspectrumbetalactamasesamongABSTRACTObjectiveToinvestigatethegenotypeandantimicrobialmechanismofextendedspectrumbetal

3、actamasesamongShigatoxinproducingE.coli(STEC).MethodsAntibioticsusceptibilityidprofile,PCRandDNAsequencingples,theretAmericanandE.coli27O157:H7fromChina,andtheybothinoglycosidesandthethirdgenerationcephalosporinssuchasceftazidime.Doubledisktestshoidof5.8kb.TEMβlactamasesencodinggeneento

4、fblaTEMDNAhadahighhomologyAmericaandChinacarrythesamegenotypeESBLs,aybethemajorresistancemechanismagainstthethirdandfourthgenerationcephalosporins.KEY和SHV型衍生的β内酰胺酶，还包括PER型酶、CTX型酶及VEB1等型酶［3］。ESBLs编码基因具有可转移性，随质粒在同种或不同种细菌间传播，导致耐药基因快速传播。国内、外不同地区肠杆菌科分离株所产生ESBLs的类型不一，以TEM型和SHV型多见，而STEC产ESBLs菌株

5、流行情况国内、外均未见报道。本文应用细菌学与分子生物学方法研究STEC菌株ESBLs的表型及基因型，探讨STEC产ESBLs的基因类型及耐药机制。1材料与方法1.1菌株STEC共36株，其中20株为美国分离株，16株为中国分离株。质控菌株大肠埃希菌ATCC25922、金葡菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853由吉林大学基础医学院病原生物学教研室提供。1.2试剂实验用MH培养基和药敏纸片购自Oxoid公司；药敏纸片(μg/片)包括：氨苄西林(AMPC)10，头孢曲松(CRO)30，头孢他啶(CAZ)30，头孢他啶/克拉维酸(CAZ/CA)30/10，头孢噻肟(C

6、TX)30，头孢噻肟/克拉维酸(CTX/CA)30/10，氨曲南(AZ)30，氨苄西林/舒巴坦(AMPC/SB)10/10，阿莫西林/克拉维酸(AMPC/CA)10/10，亚胺培南(IMP)10，氯霉素(CHL)30，庆大霉素(GM)10，四环素(TC)30，环丙沙星(CPLX)5，复方磺胺甲口恶唑(SMZ/TMP)1.2/23.7，红霉素(EM)15，链霉素(SM)10和阿米卡星(AMK)50；TaqDNA聚合酶、dNTP混合液、DNA分子标准参照物购自TaKaRa。PCR产物纯化、凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒购自QIAGen公司。1.3仪器GeneAmpRPCRSys

7、tem2700AppliedBiosystem(USA)，DYYⅢ型水平电泳仪(北京市六一仪器厂)，UVWHITE2020D凝胶成像分析系统(USA，coldspring)。1.4药敏实验采用琼脂纸片扩散法测定36株STEC对18种抗菌药物的敏感性，药敏判定标准遵照美国临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS2002)规定执行。大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853作为药敏质控菌株［4］。1.5ESBLs表型确定试验采用双纸片协同试验，将初选可疑ESBLs菌株用头孢噻肟、头孢噻肟+克拉