exendin4对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞增殖

《exendin4对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞增殖》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、Exendin4对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞增殖【摘要】目的观察Exendin4对链脲佐菌素(STZ)造模糖尿病(DM)大鼠的空腹血糖(FBG)、胰岛功能及胰岛β细胞增殖数目表达的影响。方法SD大鼠高脂喂养结合小剂量腹腔注射STZ(35mg/kg)，制备2型糖尿病(T2DM)大鼠模型，随机分成DM组及Exendin4治疗低、中、高剂量组，并设立正常对照组，Exendin4给药6in，限制了它的相关临床应用。其长效类似物Exendin4（商品名Exenatide）已经获得FDA批准上市。Exendin4是一种从蜥蜴的唾液腺

2、分泌物中提取的物质,由39个氨基酸残基组成，53%的氨基酸序列与GLP1同源。Exendin4同样能促进DM小鼠胰岛素分泌,降低血糖〔3〕。本研究观察Exendin4注射后对STZ造模T2DM大鼠空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素以及胰岛细胞增殖率的影响，探讨Exendin4保护胰岛功能的作用机制。　　1材料与方法　　1.1动物及饲料　　体重190～230g成年雄性SD大鼠及基础饲料由徐州医学院实验动物中心提供。高脂饲料组成的各成分质量百分比:基础饲料67.75%,猪油10%，蔗糖20％，胆固醇2.5%

3、,胆盐0.25%。　　1.2试剂　　链脲佐菌素(STZ)购自Sigma公司;Exendin4购自TOCRIS公司；胆固醇、胆盐购自南京生化制药厂；柠檬酸、柠檬酸三钠购自上海前尘生物有限公司；胰岛素放免试剂盒购自北京市原子高科生物技术有限公司；胰岛素抗体购自武汉博士德生物技术有限公司；小鼠两步法试剂盒购自北京中杉生物技术有限公司。　　1.3主要仪器　　罗氏血糖仪及血糖试纸(瑞士罗氏公司),OlympusAU2700全自动生化分析仪(日本Olympus公司)，BIORADD10全自动糖化血红蛋白仪(美国BIORAD公司)。胰岛

4、素放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所)，GC911γ放射免疫计数器（中国科学技术大学科技实业总公司）。　　1.4DM动物模型复制、分组及处理　　48只成年雄性SD大鼠(190～230)g喂养于动物中心屏障系统中，室温20～25℃,相对湿度62%～80%,光照规律12h。基础饲料喂养适应7d后,将实验动物随机分为正常对照(NC)组和高脂饮食组。NC组8只,基础饲料喂养到实验结束；高脂饮食组40只,高脂饲料喂养1月后,左下腹腔一次性注射STZ35mg/kg（STZ4℃避光保存，用0.1mol/L的柠檬酸缓冲液在冰浴下配制成10

5、g/LSTZ溶液,调至pH4.4,现配现用）。分别于给药1及2mol/L确定为成模,本实验成模35只，取其中32只（去除体重过轻及血糖过高的3只）随机分为低剂量治疗(EL)组、中剂量治疗(EM)组、高剂量治疗(EH)组和DM组;各组间FBG及体重无统计学差异。EL、EM、EH组分别腹腔注射Exendin42、4、8μg/kg（灭菌注射用水配置成1μg/ml）1次/d,DM组和NC组给予腹腔注射生理盐水0.7ml。药物治疗共6g/kg)腹腔麻醉,心脏采血2～3ml，普通管3000r/min,离心15min,取血清-20℃保存，用于

6、检测血清生化学指标。然后将动物处死,取胰尾组织1cm×1cm放入100ml/L中性甲醛溶液固定,以备病理组织学观察和免疫组织化学染色。　　1.5血生化指标检测　　FBG测定采用葡萄糖氧化酶法；HbA1c采用高压液相色谱法；甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）采用OlympusAU2700全自动生化仪检测；血清胰岛素采用放射免疫试剂盒检测。　　1.6胰岛HE染色和免疫组化染色　　胰腺组织置于中性甲醛溶液中固定24h，取出作石蜡包埋，切片厚4μm。HE染色后,显微镜下观察并拍照。取胰腺组织石蜡切片行非生物素二步法免疫组化染色:组织切片脱

7、腊至水,PBS冲洗，微波修复（组织切片置于0.1mol/L枸橼酸钠溶液中最大火2.5min使沸腾，最小火10min，自然冷却至室温），3％的H2O2室温10min,灭活内源性过氧化物酶,PBS冲洗。滴加一抗:胰岛素（小鼠单抗）1∶100，PA（小鼠单抗）1∶40，4℃孵育过夜,阴性对照片用PBS代替一抗，按试剂盒操作说明进行免疫组化反应,用DAB系统显色2～5min。苏木素衬染、脱水透明后,中性树胶封片,显微镜下观察。免疫组化染色结果：胰岛素表达于胞质,PA表达于胞核,阳性表达均为棕黄色颗粒；用Olympus显微摄像系统采集图片，

8、采集图像在同一光强度，同一放大倍数下进行，其中每张切片取5个完整的胰岛。对所采集图片用ImageProPlus6.0软件进行处理。　　1.7统计学处理　　数据以x±s表示,用SPSS13.0统计软件,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验