β3 .ar激动剂brl35135、氯沙坦和二甲

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1、β3.AR激动剂BRL35135、氯沙坦和二甲【关键词】前列腺癌细胞　　Abstract:ObjectiveTodetectmultidrugresistanceinbladdertumor，thustoselectsensitivedrugstotreatinvasivebladdertumor.MethodIn10casesofbladdertumors，P-gp，GST-pandTopoⅡmunohistochemistrytechniquebeforeintra-arterialchemotherapy.ResultsBefore

2、intra-arterialchemotherapytheexpressionrateofP-gpotherapydrugothera-py，theexpressionrateofP-gpor.　　Keyor;multidrugresistance;immunohistochemistry;chemotherapy［摘要］目的:探讨过氧化物还原酶1（Prx1）表达增加对人肿瘤细胞抗过氧化氢毒性作用的影响。方法:构建Prx1真核表达质粒，稳定转染培养的人PC3前列腺癌细胞，用TT法观察细胞的存活率。结果:TT分析表明，在过氧化氢浓度为0.2

3、5、0.5、1和2mmol・L-1时，Prx1稳定转染的PC3细胞存活率显著增加。结论:Prx1高表达显著增强人PC3前列腺癌细胞抗过氧化氢毒性作用。　　［关键词］过氧化物还原酶1;前列腺癌细胞;过氧化氢;稳定转染　　在正常细胞代谢和对外部刺激的反应过程中，细胞可产生活性氧，包括氧自由基和过氧化氢（H2O2）等等。低浓度活性氧可促进多种细胞生长、增殖［1］;相反，活性氧异常增加导致细胞损伤、死亡［2，3］。为了对抗高浓度活性氧的毒性作用，经过漫长的生物进化，需氧生物特别是人类细胞都有一整套抗氧化防御机制，包括过氧化氢酶（ca

4、talase，Cat）、超氧化物歧化酶（su-peroxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽（glutathione，Glu）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase，GPx）、硫代还原物（thioredoxin，Trx）、硫代还原物还原酶（thioredoxinreductase，TR）和过氧化物还原酶（peroxiredoxin，Prx）［4］等等。　　Prx是一类新定义的抗氧化物，在生物进化中高度保守，从低等原核生物细菌到高等生物人类，均有Prx表达。迄今，这个家族已有数百个成员。在人类组织细胞中发现

5、了6种Prx［5］，其中，Prx1、Prx2、Prx3和Prx4含有两个保守的以半胱氨酸为中心的活性区域，称为2.CysPrx;而Prx5羧基端半胱氨酸不在保守区域，称为非典型的2.CysPrx;Prx6缺乏羧基端半胱氨酸，称为1.CysPrx。在这些Prx中，Prx1、2和6位于细胞浆内，Prx3特异性位于线粒体内，Prx4为分泌型，Prx5既位于过氧化物酶体，又位于线粒体内。已有资料表明，许多Prx能够降低H2O2和其他过氧化物对细胞的损害。Prx1转染能提高人内皮细胞抗H2O2毒性作用［6］;Prx1或Prx2转染能降低H2O2诱导

6、的大鼠甲状腺细胞FRTL.5的凋亡［7］。与相应的周围组织比较，胰腺癌［8］和间皮瘤［9］组织表达Prx1增多;乳腺癌［10］、肝细胞癌［11］和间皮瘤［9］组织表达Prx3增多。本研究将观察Prx1稳定高表达是否影响人PC3前列腺癌细胞对H2O2的敏感性。　　1材料与方法　　1.1试验材料　　限制性内切酶购自NEB公司，四甲基偶氮唑盐（MTT）和抗微管蛋白抗体购自Sigma公司。抗Prx1多克隆抗体和pT7Prx1质粒参见文献［5］。　　1.2质粒构建　　用限制性内切酶BamHⅠ和XbaⅠ酶切pT7Prx1生成人Prx1cDNA完整开放

7、读码框架（openreadingframe，ORF），与经同样酶切的真核表达载体pcDNA3连接，生成质粒pcDNA.Prx1。　　1.3细胞培养　　人PC3前列腺癌细胞（美国ATCC公司）被置于含10%胎牛血清、2mmol・L-1谷氨酰胺、100kU・L-1青霉素和100mg・L-1链霉素的DMEM完全培养基中，37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养。待细胞于2～3d基本融合，用0.125%胰蛋白酶.0.5%EDTA混合液消化，按1∶3～1∶4传代培养。　　1.4稳定转染　　PC3细胞接

8、种在培养皿中于体积分数为0.05的CO2中37℃培养16～20h后，以pcDNA3空载体为阴性对照，用lipofectamineTM2000（Invitrogen）将pcDNA.Prx1转染细