蝎毒抗癌多肽对卵巢癌细胞株生长抑制及凋亡的影响

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1、蝎毒抗癌多肽对卵巢癌细胞株生长抑制及凋亡的影响徐波王洁曾建华魏莲【摘要】目的：研究蝎毒抗癌多肽体外能否抑制卵巢癌细胞株3AO的生长及诱导其发生凋亡。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测蝎毒抗癌多肽体外对卵巢癌细胞株3AO的生长与增殖的影响、流式细胞仪的方法进行凋亡峰的检测。结果：蝎毒抗癌多肽体外作用于卵巢癌细胞株3AO后，能明显抑制其生长，并呈剂量效应关系。流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰，且峰值也呈剂量效应关系。结论：蝎毒抗癌多肽体外能抑制卵巢癌细胞株3AO的生长，并能诱导其发生凋亡。【关键词】蝎毒抗癌多肽；卵巢癌；凋亡PolypeptideExtract

2、FromScorpionVenom(PESV)InhibitsProliferationandInducesApoptosisonOvarianCancerCellLines3AOinVitro〔Abstract〕ObjectiveTostudyinedbyMTT.Apoptoticpeakinedbyfloetry.ResultsPESVcouldinhibitproliferationofovariancancercelllines3AOinvitroandithadsomedose-effectrelation.Apoptoticpeaketr

3、yanditalsohadsomedose-effectrelation.ConclusionPESVcaninhibitproliferationandinduceapoptosisonovariancancercelllines3AOinvitro.〔KeyTT法、流式细胞术、探讨PESV对卵巢癌细胞的生长及增殖的抑制作用和诱导凋亡的作用。1材料与方法1.1卵巢癌细胞株3AO，重庆医科大学基础研究所提供，用RPMI-1640培养基培养，含10%小牛血清，2mmol/L谷氨酰胺，用0.1%胰酶消化传代。1.2PESV由广州医学院提供，经冷冻干燥后的

4、PESV于-20℃保存，使用时配成所需浓度。1.3细胞增殖分析用MTT法分析PESV对3AO卵巢癌细胞株细胞增殖活性的影响。实验分调零孔（等体积培养液）、阴性对照组（培养液和单细胞悬液）、顺铂组（培养液、单细胞悬液和顺铂），PESV组（培养液、单细胞悬液和PESV），细胞接种于96孔板，细胞数为每孔8×100个/100L，每个浓度设3个复孔，接种24h后，分别加入不同浓度的顺铂和PESV，继续培养48h后加入20L浓度为5mg/mL的MTT，继续培养4h，弃去培养基后每孔加入200LDMSO，充分溶解后，用酶标仪于570nm波长下读取每孔的吸光度A（

5、OD值）。细胞增殖抑制率（IR）按以下公式计算：1.4流式细胞仪检测细胞经过不同药物处理48h后，将处理后的细胞用0.1%胰蛋白酶消化，PBS吹打成单个细胞悬液。离心后用70%乙醇固定过夜。记数细胞，细胞数不少于5×104/mL。加PI染色液，染色约20min，进行流式细胞仪检测，CellQuest和ModFitLT软件分析结果。2结果2.1MTT结果MTT结果显示随着PESV浓度的增加，对卵巢癌细胞株3AO的生长抑制作用越来越明显，呈剂量效应关系。（当剂量增加至60g/mL，120g/mL时，IR分别增加为42.1%和61.2%，与阴性对照组相比，

6、P0.05），顺铂在2g/mL时也开始对卵巢癌细胞株3AO产生明显的抑制作用，也呈剂量效应关系，见表1。2.2流式细胞仪检测用流式细胞仪检测经PESV处理后的卵巢癌细胞株3AO细胞，可见凋亡峰的出现，且峰值随处理浓度的加大而增大（见图1、图2）。未处理的卵巢癌细胞株3AO细胞不能检测到凋亡峰（见图3）。3讨论卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一，近年来，其发病率呈上升趋势。对卵巢癌的治疗主要以手术和化疗为主，但因其难以早期发现及早期治疗，预后往往不佳。我国的传统医学博大精深，有丰富的中医药资源，科研工作者已经不断从我国传统中药中发现了许多具有抗癌疗效的药物，

7、应用于临床，取得了较好的疗效[1]。大量的实验研究证明，蝎毒多肽提取物可抑制多种肿瘤细胞的增殖与生长，本研究也表明，当PESV浓度在60g/mL时，能显著抑制卵巢癌细胞株3AO的增殖与生长，细胞增殖抑制率达到42.1%，当PESV浓度加大到120g/mL时，细胞增殖抑制率达到61.2%，呈明显的剂量效应关系。许多的研究表明，PESV具有抑制肿瘤细胞增殖的作用，其机理可能是通过影响细胞周期的进行，使G1期细胞增多，S期细胞减少，从而达到细胞增殖的抑制作用[2]。我们将在今后的工作中做进一步的研究。凋亡是生物体内普遍存在的一种生理性现象，细胞的增殖与凋亡

8、相互平衡才能维持组织器官正常的生理功能和细胞数的稳定。如果细胞增殖和凋亡的平衡被打破则可以导致肿瘤的发生。随