纸片法与沙氏培养法对真菌敏感性的研究

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1、纸片法与沙氏培养法对真菌敏感性的研究杨光建云南省边防总队医院检验科，云南昆明650101[摘要]目的探讨中西药联合治疗真菌感染的临床效果。方法氟康唑、酮康唑以及制霉菌素应用纸片法，苦参、黄芪以及黄连应用沙氏培养法分别对念珠菌45株进行药敏测验，并分析实验结果。结果氟康唑、酮康唑、制霉菌素对45种念珠菌抑菌作用中，高敏感菌株数量分别为40、38、22株，苦参、黄芪以及黄连沙氏基对45种念珠菌抑菌试验中黄连抑菌效果最好，分别为26.67%、0、100%，联合药敏试验结果显示黄连及酮康唑之间协同作用比

2、较明显。结论中西药联合抑制真菌，效果良好，值得在临床推广和应用。[.jyqkg×6s）、酮康唑（由西安杨森制药有限公司生产，规格0.2g×6s）、制霉菌素（由山东鲁抗医药股份有限公司生产，规格25万单位），药敏纸（由上海宝曼生物科技有限公司生产，含量99%），采用直接浸泡法制成含药纸片（每片药物含量50μg），在37℃烘干后，在4~10℃条件下进行保存；③中药液，黄连、黄芪及苦参（均购自亳州市自然泰食品经营部）均称取100g，加入自来水进行浸泡，持续12h，将中药熬煮并浓缩成200mL，制成生药

3、液，含量0.5g/mL，并进行高压灭菌处理，15磅持续20min；④培养基制作，严格按照全国标准操作规程中沙氏培养基制作方法制作中药培养基[3]，其中蒸馏水应用含有一定浓度有效成分的中药液代替。1.2试验方法应用游标卡尺分别对3种西药的45株念珠菌抑菌环进行测量，耐药抑菌环标准为6~10mm直径，中度敏感抑菌环直径为11~20mm，敏感抑菌环直径为21mm[4]。1.2.1应用纸片法进行西药药敏试验用无菌棉签将念珠菌液（2.0麦氏单位）在沙氏培养基上均匀涂抹，将含有西药的纸片贴在培养基上，在28

4、℃条件下进行培养，时间持续24h，应用游标卡尺对抑菌环直径进行测量。1.2.2中药药敏试验将按照2.1方法制作的中药沙氏培养基分别制成平板状，用无菌棉签将念珠菌液（2.0麦氏单位）在沙氏培养基上均匀涂抹，在28℃条件下进行培养，时间持续24h，然后对念珠菌的生长状况进行观察。1.3联合药敏试验选择按照上述方法制作的黄连沙氏培养基，将念珠菌液（含量2.0麦氏单位）均匀涂抹，将3种西药纸片分别贴在培养基上，在28℃条件下进行培养，时间持续24h，应用游标卡尺对抑菌环直径进行测量。1.4诊断标准与培养

5、鉴定所取得的血液、体液以及相关引流物，均采取培养、镜检、试验。诊断标准：由国家所属的医疗监控小组进行诊断标准的制定[5]。被检验液体中，一旦出现一种连续送检3从以上的，均视为病菌分离出，则判定抗真菌治疗的效果。*表示没有抑菌作用，念珠菌生长状况良好；**表示抑菌作用部分有效，念珠菌生长受到一定限制；***表示抑菌作用良好，念珠菌完全不生长。1.5统计学处理采用SPSS统计学软件对数据进行统计学处理，其中计数资料采用检验，计量资料应用检验，<0.05，数据差异具有统计学意义。2结果2.1西药

6、抑菌作用对比三种西药抑菌效果，氟康唑敏感菌株40株，高于酮康唑的38株及制霉菌素的22株，说明氟康唑抑菌效果最好，详见表1。2.2中药抑菌作用分别对3种中药的45株念珠菌的抑菌作用进行测量，试验用中药液有效成分浓度为0.5g/mL。黄连沙氏培养基敏感菌株45株，明显高于苦参及黄连沙氏培养基的12株及0株，说明黄连对于念珠菌的抑制效果优于黄连及苦参。详见表2。2.3测量黄连抑菌浓度最低值在45株念珠菌中选择32株，对黄连抑菌浓度最低值进行测量，详见表3。结果显示不同黄连浓度沙氏培养基上抑菌浓度最低

7、值不同，抑菌浓度最低值1:8及1:16的念珠菌株分别为6株、8株，抑菌浓度最低值1:32的念珠菌株19例，而在抑菌浓度为1:50及1:64的沙氏培养基上，32株念珠菌均能生长，选择1:50作为联合药敏试验沙氏培养基中药浓度。2.4联合药敏试验联合药敏试验显示，黄连仅对酮康唑抑菌环具有扩大作用，扩大效应最明显的是伪热带念珠菌，选择白色念珠菌26株、伪热带念珠菌2株、热带念珠菌4株，进行联合药敏试验。其中，白色念珠菌联合药敏试验中，中西药联合应用同单纯应用酮康唑抑菌环进行比较，联合应用抑菌环比较大，

8、直径超过8mm10株，超过4mm12株，小于4mm3株，抑菌环缩小者1株，说明中西药对约67%的白色念珠菌协同作用比较明显，详见表4。3讨论近年来，随着临床真菌感染率的不断增加，感染病原菌除了常见真菌种类外，部分罕见真菌也时有媒体关注。针对日趋严重的真菌感染，抗真菌药物研究逐渐成为医学领域的研究热点。临床治疗真菌感染药物可分为中药、西药以及中西联合药物三种，常用西药种类丰富，多烯类药物如制霉菌素等；三唑类药物如氟康唑等；常用中药多样、成分复杂，主要包括单味中药剂中药有效活性成分两大类[6]，如牡