软骨素酶abc促进大鼠脊髓损伤后轴突再生和功能恢

《软骨素酶abc促进大鼠脊髓损伤后轴突再生和功能恢》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、软骨素酶ABC促进大鼠脊髓损伤后轴突再生和功能恢【摘要】目的探讨软骨素酶ABC(ChABC)对大鼠脊髓横断损伤(SCI)后轴突再生和功能恢复的影响。方法SD大鼠随机分为实验组(SCI+ChABC)，对照组(SCI+NS)及正常组。采用T78脊髓完全横断模型，术后2周和10周脊髓标本分别行OBT、GFAP、NSE及NF免疫组化染色，术后1、2、3、4、5、6、8、10周进行行为学评分。结果行为学评分，术后3周实验组评分高于对照组(P<0.05)，同时实验组疤痕中OBT和GFAP染色低于对照组(P<0.05),GFAP和NF染色高于对照组(P<0.05)

2、。结论ChABC能有效降低损伤部位硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)的活性，从而促进SCI大鼠感觉、运动功能的恢复和轴突的再生。【关键词】脊髓横断损伤;软骨素酶ABC;硫酸软骨素蛋白多糖;功能恢复;轴突再生【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofchondroitinaseABC(ChABC)onthefunctionalrecoveryandaxonalregenerationoftransectedspinalcordinrats.MethodsSDratslydividedinto3groups:normalgroup,con

3、trolgroup(SCI+NS)andexperimentalgroup(SCI+ChABC).ThetransverseinjurymodelsadebeteenthespinalcordofT7andT8.ImmunohistochemistryofOBT,GFAP,NSEandNFedat1,2,3,4,5,6,8and10entalgroupparedentalgroupdecreasedsignificantlythanthoseincontrolgroupentalgroupincreasedsignificantlythanthoseincontrolg

4、roup(P<0.05).ConclusionChABCcanreduceCSPGsactivityattheinjurysites.Therefore,itcanpromotetherecoveryofmotorandsensoryfunctionasg/kg)，取后正中切口，暴露T78和T910脊髓，在T78用弯刀片完全切断脊髓，并用探针证实。经T910椎板下蛛网膜下腔置入灌注管(PE10导管，外径0.61mm，内径0.28mm)至损伤平面并固定，止血，缝合。立即予以灌注1次。待动物苏醒后送动物房分笼喂养，定时排尿(2～3次/日),加强护理,必要时腹

5、腔抗生素注射。40只造模成功的大鼠随机分为实验组和对照组，另取10只未手术大鼠为正常组。实验组：蛛网膜下腔灌注高纯度ChABC6μl(10U/ml)，10d内隔天经PE管缓慢灌注。对照组灌注生理盐水(NS)6μl，方法同前。　　1.2行为学评分术后1周开始行为学评分并持续到术后10周，本实验采用BBB法(BassoBeattieBresnehan)并结合部分CBS法(binedbehaviorassessment)指标，正常组评分为53.5分。BBB法是将大鼠放置在1.5m×2.0m×1.5m的桌面上，桌面上铺一薄层一次性治疗巾以增加粗糙度，便于实验大鼠行走,2mi

6、n之后开始行为学观察，观察期为5min，依据BBB评分标准进行评分记录。CBS法的观察指标为：脚趾伸展、触地反应、回缩反射和斜板试验[1]。　　1.3组织学观察术后2周、10周分别行脊髓取材。氯胺酮腹腔麻醉，先用灌注泵快速注入370C肝素NS(12500U肝素/500mlNS)200～400ml，换用4%多聚甲醛(pH7.4，40C)灌注(300～500ml)。灌注时间约1h.然后，切开大鼠背部皮肤，仔细取出脊髓(包括损伤平面上下各1cm)，置入4%多聚甲醛液中固定12h.脊髓标本行石蜡包埋，横行切片，厚度20μm.分别行抗硫酸软骨素单克隆抗体(OBT1969)、胶质纤

7、维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经中丝蛋白(NF200)免疫组化染色。采用LDP二步法，使用DAKO公司生产的Envision试剂盒，按试剂说明书进行操作。采用BDA呈色，阳性表达为棕黄色。　　1.4图像分析每张切片采用Spot图像分析处理系统，高倍镜(×400)下任取5个视野，计数每个视野内染色的阳性面积。　　1.5统计学处理采用SSPS10.0软件分析数据。免疫组化的图像分析数据采用单因素方差分析;BBB评分的统计方法采用两因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1行为学评分术