ca2+浓度对罗氏沼虾gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响

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1、ca2+浓度对罗氏沼虾Gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响摘要：采用免疫胶体金电镜技术研究光暗适应条件下不同ｃａ２＋浓度对罗氏沼虾（macrobrachiumrosenbergi）感光细胞中ｇｑ蛋白α亚基亚细胞定位的影响。结果表明，对于光适应组，在高ｃａ２＋溶液、生理溶液和低ｃａ２＋溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是３．５１、２．１３和０．９３。对于暗适应组，在高ｃａ２＋溶液、生理溶液和低ｃａ２＋溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是３．０１、１．０８和０．４７。这些表明了罗氏沼虾感光细胞中ｇｑ蛋白α亚基在暗适应条件下同时分配在感杆束和细胞质

2、中。在光照和细胞质内ｃａ２＋浓度适度升高的条件下，膜结合的ｇｑ蛋白α亚基进而转化为可溶性的ｇｑ蛋白α亚基。关键词：罗氏沼虾（macrobrachiumrosenbergi）；感光细胞；ｇｑ蛋白；ｃａ２＋；免疫胶体金电镜ａｂｓｔｒａｃｔ：ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃａ２＋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｇｑｐｒｏｔｅｉｎαｓｕｂｕｎｉｔｉｎｔｈｅｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｃｅｌｌｏｆｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉｗｉｔｈｌｉｇｈｔａｎｄｄａｒｋａｄａｐｔａｔｉｏｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｅｒｅｓ

3、ｔｕｄｉｅｄｕｓｉｎｇｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｕｎｄｅｒｌｉｇｈｔａｄａｐｔａｔｉｏｎｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅｄｅｎｓｉｔｙｒａｔｉｏｏｆｔｈｅｇｏｌｄｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｎｒｈａｂｄｏｍｔｏｔｈａｔｉｎｔｈｅｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｎｍ．ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｃｅｌｌｉｎｈｉｇｈｃａ２＋ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｌｏｗｃａ２＋ｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓ３．５１，２．１３ａｎｄ０．９３，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌ

4、ｙ．ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｒａｔｉｏｕｎｄｅｒｌｉｇｈｔａｄａｐｔａｔｉｏｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｎｈｉｇｈｃａｌｃｉｕｍｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｌｏｗｃａｌｃｉｕｍｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓ３．０１，１．０８ａｎｄ０．４７，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇｔｈａｔｇｑpｒｏｔｅｉｎαｓｕｂｕｎｉｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｂｏｔｈｏｎｔｈｅｒｈａｂｄｏｍａｎｄｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｎｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｃｅｌｌｏｆｍ．ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉｕｎｄｅｒｄａｒｋａｄａｐｔａｔｉｏｎ．ｔｈｅｍｅｍ

5、ｂｒａｎｅ－ｂｏｕｎｄｇｑｐｒｏｔｅｉｎαｓｕｂｕｎｉｔｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏｓｏｌｕｂｌｅｇｑｐｒｏｔｅｉｎαｓｕｂｕｎｉｔｕｎｄｅｒｌｉｇｈｔａｎｄａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｈｉｇｈｃａ２＋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉ；ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｃｅｌｌ；ｇｑｐｒｏｔｅｉｎ；ｃａ２＋；ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｃｏｐｙ免疫胶体金电镜是研究生物大分子在亚细胞水平的定位、进一步探讨大分子功能的最重要技术之一，ｉｇｇ具有双价性，它的一臂可结合到事先包被有

6、抗原的胶体金上，也可以把抗体分子包被在胶体金上对细胞内的抗原进行定位。该技术首先用胶体金颗粒对抗原的抗体进行标记，然后用标记抗体对组织超薄切片进行免疫反应，有抗原存在的细胞结构即被胶体金颗粒标记，在电镜下根据胶体金颗粒的分布情况及密度即可确定抗原的亚细胞分布及相对含量。近年来胶体金探针己成为定位和分析多种蛋白质、多肽、多糖的有力工具，特别是在抗原酶及激素等物质的细胞免疫化学定位中更加显示了其独特的作用。罗氏沼虾（macrobrachiumrosenbergi）感光细胞中ｇｑ蛋白α亚基有可溶性和膜结合两种形式［１，２］，ｇｑ蛋白α亚基在光感觉生理

7、中的作用不仅取决于不同形式ｇｑ蛋白α亚基含量的变化，而且与其在细胞内的分布密切相关［３－５］。采用生理生化的方法能测定不同形式ｇｑ蛋白α亚基的含量，而采用免疫定位可以反映其细胞及亚细胞分布变化。采用免疫胶体金电镜技术研究光暗适应条件下不同ｃａ２＋浓度对罗氏沼虾感光细胞中ｇｑ蛋白α亚基的影响，以期从亚细胞水平揭示ｃａ２＋与ｇｑ蛋白α亚基之间的关系，为阐明ｇｑ蛋白α亚基的作用机制及ｃａ２＋在光感觉生理中的作用打下基础。１材料与方法１．１材料罗氏沼虾购买于上海市漕河泾农贸市场，试剂、药品均为进口分装或国产分析纯。兔抗ｇｑ蛋白α亚基的抗血清ｃ端序列（ｉ

8、ｍｙｓｈｌｖｄｙｆｐｅｙｄｇｐｑｒ）购买于美国ｂｉｏｄｓｉｇｎ公司。１．２方法１．２．１样品的处理将购买来的１２只罗氏沼虾随机平均分成２组饲养在河水中