cu2对罗氏沼虾几种同工酶影响

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1、论文题目：Cu2+对罗氏沼虾几种同工酶的影响学科专业：动物学学位申请人：俞亚东指导教师：许燕副教授摘要罗氏沼虾(MaorobrachJumrosenbergYi)，因肉多味美、营养价值高等优点，受到人们的欢迎，其养殖规模日益扩大。然而随着工业废水和生活污水排入江河湖海，特别是在养殖中频繁使用硫酸铜清塘灭藻，使得养殖水体中cu2+含量迅速增加，给罗氏沼虾的养殖带来了潜在的威胁。铜是甲壳动物重要的营养元素，对多种生长发育相关的生物酶的组成和功能有着重要作用，但是过量的Cu2+会对虾体产生毒害。2003年度的《中国渔业生态环境状况公报》指出，以Cu2+浓度不超过

2、0．Olmg／L为标准，但局部水域污染超标程度却在增加，如杭州湾、舟山近海和长江口均高达0．07mg／L。因此，研究Cu2+对罗氏沼虾的影响不仅对深入了解其生理机制具有重要意义，而且对甲壳动物的健康养殖具有重要的参考价值。同工酶作为一种生化指标，已广泛应用于物种及杂种鉴定、基因表达与调控等研究中。虽然已有很多报道研究重金属对甲壳动物的毒性作用，但Cu2+污染对罗氏沼虾同工酶影响的报道尚不多见。在本研究中，我们采用生态学单因子梯度试验方法，选取与局部受污染水域中接近的Cu2+浓度(0．08mg／L)，并参考相关文献与亚急性毒性实验的要求，配成O．01mg／L

3、、0．08mg／L、0．64mg／L、5．12mg／L浓度梯度。饲养受试虾一周后，从酶活力、同工酶电泳酶谱和酶细胞化学定位电镜观察三个角度探讨Cu2+对罗氏沼虾复眼、鳃、肝胰腺、心脏和肌肉五种组织内几种同工酶(酯酶(EST)、过氧化物酶(PoD)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP))影响，以期了解Cu2+对罗氏沼虾生理生化的影响，为健康养殖罗氏沼虾提供参考意见。1．Cu2+对罗氏沼虾五种组织中EST、POD、SOI)酶活力的影响本文利用分光光度法测定不同浓度Cu2+饲养罗氏沼虾一周后，其五种组织中EST、POD、SOD的酶

4、活力变化，并对实验数据用SPSS软件分析差异显著性，结果如下：EST活力变化情况：复眼、肌肉和心脏中EST活力弱且变化差异性不显著，鳃中EST活力受低浓度Cu2+促进，当Cup为0．64mg／L时达到最大，随后Cu2+为5．12mg／L时下降，各Cu2+处理组均与对照组有显著差异(P(O．05)；肝胰腺中EST活力总体上成先上升后下降趋势，在Cu舢为0．Olmg／L时酶活力达到最大，除在Cup为0．64mg／L时略有上升外，其余均成下降趋势，各Cu2+处理组均与对照组有显著差异(尺O．05)。POD活力变化情况：复眼、肌肉和心脏中POD活力弱且变化差异性相

5、对不显著，鳃中POD活力受低浓度Cu2+促进，在Cu2+为0．64mg／L时达到最大，而在5．12mg／L时活力下降，各Cu2+处理组与对照组差异显著(P(O．05)；肝胰腺中POD活力有一定波动性，先上升，在Cu2+为0．Olmg／L时达到最大，而后下降，在Cu2+为0．64mg／L时略有上升后继续下降，各Cu2+处理组与对照组有显著差异(尺O．05)。SOD活力变化情况：低浓度Cu2+导致五种组织中SOD活力均明显增加，复眼和心脏中SOD活力在Cu2+为0．08mg／L时达到最大，其余三种组织中SOD活力在Cu2+为0．64mg／L时达到最大。而当Cu

6、2+达到5．12mg／L最高浓度时，导致五种组织中SOD活力的均明显下降，其中鳃、肝胰腺和心脏中SOD活力变化与对照组差异性较为显著。总之随着Cu2+浓度的增加，EST、POD和SOD活力总体上是先上升，后下降，有一定的剂量一一效应关系，在鳃和肝胰腺中尤为明显，因而可以考虑分析这两种组织中几种酶活力的变化来了解Cu2+对虾体的胁迫程度。2．cu2+对罗氏沼虾五中组织中BST、POD、SOD同工酶酶谱的影响本文采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术以及同工酶染色技术，对饲养后虾体五种组织中EST、POD、SOD进行电泳酶谱分析，发现三种同工酶在五种组织中的分布和

7、表达具有明显的组织特异性。结果如下：EST酶谱变化情况：EST在肝胰腺和鳃中表达较强，酶带数较多，五种组织中均没有发现酶带缺失或新增现象。随着Cu2+浓度的增加，复眼、心脏和肌肉中酶带没有发现显著变化；鳃中的六条酶带成规律性变化，颜色均先加深，在Cu2+为0．64mg／L时最深，而后在Cu2+为5．12mg／L时均略变浅；肝胰腺中EST表达最强，共有5条酶带，其中有3条酶带(Rf=O．078、0．703、0．859)颜色深浅有显著变化，其变化趋势与相应酶活力变化相吻合，另有2条酶带(Rf=O．391、0．469)颜色深浅无明显变化。POD酶谱变化情况：复眼

8、、心脏和肌肉中POD酶带数少，且随着Cu2+浓度的增加，酶带没有发