丙泊酚对大鼠缺血再灌注肾nfκb、tnfα表

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1、丙泊酚对大鼠缺血再灌注肾NFκB、TNFα表【摘要】目的研究丙泊酚对大鼠肢体缺血再灌注损伤后肾组织中肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα，TNFα)、核因子κB(nuclearfactorκB，NFκB)表达的影响。方法24只SD雄性大鼠，随机分为假手术对照组(A组)，肢体缺血再灌注组(B组)和丙泊酚干预组(C组)，每组8只。采用免疫组织化学方法检测TNFα、NFκB的表达，行图像分析半定量。结果B组大鼠肾组织中TNFα、NFκB的表达明显高于A组(P＜0.05)，C组明显低于B组(P＜0.05)。结论肢体缺血

2、再灌注后有明显肾损伤，丙泊酚对肢体缺血再灌注肾损伤有一定程度的保护作用，其机制可能与下调大鼠肢体缺血再灌注损伤肾组织中TNFα、NFκB的过度表达有关。　　【关键词】丙泊酚；肾；肢体缺血再灌注；肿瘤坏死因子α；核因子κB　　肢体缺血再灌注损伤是外科常见的病理生理过程，如止血带使用时间过长、创伤、断指再植、血栓再通等都可以引起肢体缺血再灌注损伤。肢体缺血再灌注除了能引起相应的肢体损伤，还可以通过神经内分泌免疫机制引发远隔脏器障碍及损伤。肢体缺血再灌注对相应肢体损伤的研究已较成熟，但对于肢体缺血再灌注引起的远隔脏器肾损伤的研究却较少见。本研究拟观

3、察大鼠肢体缺血再灌注后肾组织中肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα，TNFα)、核因子κB(nuclearfactorκB，NFκB)的变化以及丙泊酚对其损伤的干预。　　1资料与方法　　1.1动物模型制备实验前禁食12h，自由饮水，25％乌拉坦(1g/kg)腹腔注射，麻醉后气管切开，接动物呼吸机机械通气(通气频率为75次/min，潮气量为8mL，吸呼比为1∶2)，于腹股沟处解剖出双侧股动脉，用无创动脉夹夹闭，远端股动脉置管测压，血压为零标志缺血成功，保持下肢缺血3h后去除动脉夹再灌注4h，恢复下肢血供，血压升高标志再灌注成

4、功。　　1.2分组及处理24只清洁级SD雄性大鼠(山西医科大学动物中心提供)，体重(200±20)g，随即分为三组，每组8只。假手术对照组(A组)：大鼠麻醉后仅分离不夹闭股动脉；肢体缺血再灌注组(B组)：夹闭股动脉缺血3h，再灌注4h；丙泊酚干预组(C组)：夹闭股动脉前10min静脉注射丙泊酚5mg/kg(AstraZeneca公司，英国)，随后以10mg/kg·h静脉输注，缺血再灌注同B组。再灌注完毕，实验动物经心脏主动脉插管灌注固定液〔4％多聚甲醛0.1mmol/L磷酸缓冲液(phosphatebuffersolution，PBS)配制〕后，处死大鼠

5、取肾，置于10％甲醛溶液中固定24h后常规石蜡包埋并切片，以备组织学检查。　　1.3肾组织TNFα、NFκB的检测选用链酶亲和素过氧化物酶复合物即用型免疫组化试剂盒(武汉博士德)，按说明书操作，取石蜡片按程序脱蜡，3％H2O2灭活内源性酶，微波抗原修复10min，5％牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BSA)封闭，分别加免抗TNFα多克隆抗体(武汉博士德)I抗、免抗NFκBp65多克隆抗体(武汉博士德)I抗，稀释度为1∶80，冰箱过夜后加山羊抗鼠免疫球蛋白G，加酶标记物，DAB显色，光镜下观察。应用Laica图像分析系统，光镜

6、放大400倍摄取图像，输入图像分析系统。每张切片随机选取60个区域，计算每张切片的平均光度，阳性单位。　　1.4统计分析计量数据以(±s)表示，统计分析采用SPSS12.0行方差分析和q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1肾组织病理学观察光镜下，A组无明显病理学改变，B组可见肾小球肿大，球囊上皮细胞肿胀，囊壁水肿，囊腔变小。间质内少量中性白细胞浸润，血管内白细胞聚集，靠边。C组肿大肾小球明显减少，囊壁水肿亦减轻，囊腔较B组变大。A组肾组织有较少量的TNFα、NFκB的蛋白表达，B组肾组织中TNFα、NFκB的表达比A组显著上

7、调(P＜0.05)，但C组大鼠肾组织中TNFα、NFκB表达明显低于B组(P＜0.05)(见表1)。光镜下观察各组蛋白表达变化，见图1～4。　　表1各组大鼠肾组织TNFα、NFκB的表达(略)　　图1－　图4略　　3讨论　　　　缺血再灌注损伤是常见的病理生理过程，越来越受到重视和研究。肢体缺血再灌注损伤的机理极为复杂：无复流导致一系列细胞结构、功能障碍；钙超载导致离子交换变化，能量代谢障碍；中性粒细胞活化引发“呼吸爆发”，产生并释放大量自由基和一些促炎症细胞因子，如NFκB、TNFα等，造成组织损伤和血管通透性增加；以及自由基损伤作用等，从而

8、引起全身炎症反应。TNFα是一种具有多种生物学活性的细胞因子，主要于单核细胞和