igf1和igf2表达与非小细胞肺癌淋巴结转移的

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1、IGF1和IGF2表达与非小细胞肺癌淋巴结转移的【摘要】目的研究胰岛素样生长因子1和2（IGF1、IGF2，合称为IGFs）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达，探讨其与NSCLC区域淋巴结转移的关系。方法采用免疫组织化学和免疫印迹技术检测IGF1和IGF2在65例NSCLC、29例癌旁肺组织和19例良性肺病变组织中的表达。结果IGF1和IGF2在NSCLC中的表达率显著高于良性肺组织。IGF1和IGF2在伴有区域淋巴结转移肺癌中的表达显著高于无淋巴结转移肺癌组织。IGF1和IGF2在伴有N2或≥

2、5个转移淋巴结肺癌组织中的表达显著高于在仅伴有N1或<5个转移淋巴结肺癌组织。IGF2在伴有多组转移淋巴结肺癌组织中的表达显著高于仅有一组转移淋巴结肺癌组织。结论IGFs不仅在NSCLC中过表达，而且与区域淋巴结转移的部位、数量及组数相关联，提示IGFs在NSCLC发生和发展中可能起重要作用，IGFs为NSCLC生物学行为尤其是淋巴结转移的判断提供一个新的有意义的指标。【关键词】非小细胞肺癌转移胰岛素样生长因子1胰岛素样生长因子2疫组织化学　　0引言　　区域淋巴结转移是影响非小细胞肺癌（NSCL

3、C）预后的重要因素[13]，其发生受到某些肿瘤相关基因的调控。胰岛素样生长因子(Insulinlikegro1.2，浓度为5μg/ml；抗IGF2抗体CloneS1F2，浓度为8.3μg/ml。4℃冰箱过夜。加生物素化猴抗鼠IgG(德国Dianova产品)。加抗生物素碱性磷酸酶复合物(美国VectorLaboratoriesInc产品)。以ASBI磷酸盐萘酚作为底物，以新品红作为色原体显现组织中的免疫反应。常规脱水、透明、封片。每次实验设阳性和阴性对照。IGFs免疫组织化学反应的评价标准：无着色

4、或弱着色细胞<5%为阴性；明显着色且着色细胞≥5％为阳性。　　1.3免疫印迹技术　　采用显微分离技术，将冷冻标本中的恶性肺组织分离并融化。将蛋白质混合物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳展开，再电转印于PVDF膜上。用与免疫组织化学染色相同的抗IGF1或IGF2抗体（浓度均为1μg/ml）与膜在室温下孵化2h。再与过氧化物酶标记的抗鼠IgG抗体(1∶2000)作用。采用增强化学发光法检测膜免疫反应条带。　　1.4分组与统计分析　　将病例按淋巴结转移情况分为有或无淋巴结转移组；其中，有淋巴结转移组参照文献[3

5、]并结合本研究资料分布特点，进一步按淋巴结分期分为N1和N2组，按转移淋巴结个数分为<5和≥5个淋巴结转移组，按淋巴结转移组数分为一组和多组转移。用卡方检验检测组间IGF1和IGF2表达的差异性，如P<0.05，则认为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1IGF1和IGF2免疫反应特性　　与阳性对照结果一致，IGF1和IGF2在肺组织中的表达位于胞浆，见图1、2。在阴性对照组织中无IGF1或IGF2着色。免疫印迹实验在免疫组织化学IGF1和IGF2阳性对应肺癌组织中分别检测出对应分子量为7

6、.7和7.5kDa的蛋白条带，见图3。　　2.2IGF1、IGF2在良性肺组织和肺癌组织中的表达　　IGF1和IGF2在肺良性病变组织中的表达率为15.8％(3/19)和21.0％（4/19），在癌旁肺组织中的表达率为13.8％（4/29）和20.7％(6/29)，在肺癌组织中的表达率为44.6％（29/65）和50.8％（33/65）。IGF1、IGF2在良性肺病变组织和癌旁肺组织中的表达无显著性差异，但均显著低于肺癌组织中的表达（IGF1的P分别为0.0228和0.0038，IGF2的P分别为0.

7、0217和0.0063）。　　2.3IGF1、IGF2表达与肺癌淋巴结转移的关系　　1A：IGF1在肺鳞癌中表达(ABCAP法×250)；2A：IGF2在肺鳞癌中表达(ABCAP法×350)　　1B：IGF1在肺腺癌中表达(ABCAP法×300)；2B：IGF2在肺腺癌中表达(ABCAP法×300)　　图1IGF1在NSCLC组织中表达图2IGF2在NSCLC组织中表达（略）　用免疫组织化学IGF1或IGF2阳性的肺癌组织(T)做免疫印迹实验，检测出分子量为7.7kDa(A)或7.5kDa(B

8、)的蛋白条带；T1～T5：病例序号　　图3免疫印迹实验检测结果　　IGF1和IGF2在伴有区域淋巴结转移肺癌中的表达显著高于无淋巴结转移肺癌组织。IGF1和IGF2在伴有N2或≥5个转移淋巴结肺癌组织中的表达显著高于在仅伴有N1或<5个转移淋巴结肺癌组织。IGF2在伴有多组淋巴结转移肺癌组织中的表达显著高于仅有一组淋巴结转移肺癌组织，但IGF1在伴有一组或多组淋巴结转移肺癌组织中的表达无统计学意义，见表1。　　表1IGF1、IGF2表达与非小细胞肺