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《论常染色体显性遗传性多囊肾病囊肿液对肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、论常染色体显性遗传性多囊肾病囊肿液对肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响--> [摘要]目的:观察常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)囊肿液对肾小管细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响,以初步探讨ADPKD囊肿发生、发展的机制。方法:用不同浓度的ADPKD囊肿液处理MDCK和LLC-PK1两株肾小管细胞,采用MTT法观察细胞增殖,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡指数。结果:(1)与对照组相比,不同浓度(10%、20%、40%、60%,V/V)ADPKD囊肿液作用24h能明显促进上述两株肾小管细胞增殖,并呈剂量依赖性;而且明显影响细胞周期
2、,使G0~G1期细胞增多、S期细胞减少。(2)高浓度(40%、60%)ADPKD囊肿液作用48h对MDCK细胞仍有上述作用,但对LLC-PK1细胞则无类似作用。(3)不同浓度ADPKD囊肿液均不诱导上述两株细胞凋亡。结论:ADPKD囊肿液可剂量依赖性地促进肾小管细胞增殖,并在24h达作用高峰,但并不诱导肾小管细胞凋亡,其机制可能与囊肿液通过激活G1期细胞,使细胞未从G1期脱离细胞周期而发生凋亡有关。 [关键词]多囊肾病常染色体显性肾小管细胞增殖凋亡Effectofcysticfluidfrompatientsaldominant
3、polycystickidneydiseaseonproliferationandapoptosisoftubularcellsculturedinvitro[ABSTRACT]Objective:Toinvestigatetheeffectofcysticfluidfrompatientsaldominantpolycystickidneydisease(ADPKD)onproliferation,apoptosisandcellcycleoftubularcellsculturedinvitro,andtoexplorethe
4、mechanismofthecystogenesisandprogressioninADPKDinitially.Methods:Tiniao/trationsofcysticfluidfromADPKDpatients.Cellproliferationetricassay,cellcycleandapoptosisindexetry.Results:IncubationADPKDfor24hpromotedtheproliferationof2tubularcellstrains,regulatedthecellcyclean
5、dprovokedG0-G1phasearrest.MDCKbutnotLLC-PK1stillhadthesameeffectafterincubationulatetheprolif-erationoftubularcellsinadose-dependentmannerandreachthepeakeffectafter24h,butcannotleadtoapoptosis,ightberelatedtoregulationofcellcycleandactivationofG0-G1phasearrest. [KEYa
6、din-Darbycaninekidneycells,MDCK)购自美国国家细胞研究中心;噻唑蓝(MTT)为Amresco公司产品;DMEM培养液为Gibco公司产品;酶标仪(Lab-systemsMK3);流式细胞仪(库尔特XL);其他试剂均为Sigma公司产品及进口分析纯。 1.3细胞增殖试验应用MTT法测定细胞增殖情况。细胞传代后取对数生长期细胞(LLC-PK1或MDCK)接种于96孔板(1×104/孔),24h(37℃,5%CO2)后加无血清DMEM培养液再孵育24h,使细胞生长同步进入休止期。弃上清,加入含不同浓度(0
7、、10%、20%、40%、60%,V/V)ADPKD囊肿液的无血清DMEM培养液作用24或48h,每组设6个复孔,每次实验重复3次。经锥虫蓝染色,活-->细胞达95%以上,于刺激结束前4h,加入MTT(5g/L),酶标仪参考波长690nm,在读数波长550nm处读取光密度(D)值。 1.4细胞周期的检测同法处理细胞,药物作用24和48h后,胰酶消化,PBS清洗,70%预冷乙醇悬浮固定细胞,-20℃过夜。加入等量PBS再洗2遍,碘化丙啶避光显色,上流式细胞仪检测,采用MCYCLE软件分析细胞周期。 1.5细胞凋亡的检测取对数生长
8、期LLC-PK1和MDCK细胞,接种于6孔板,加入含不同浓度(0、10%、20%、40%、60%,V/V)ADPKD囊肿液的10%新生牛血清DMEM培养液作用24或48h后收集细胞,上流式细胞仪,采用MCYCLE软件分析并计算凋亡指数。 1.6统
