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1、益肾通肺汤对实验性慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织MM【摘要】目的观察益肾通肺汤对实验性慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,以探讨其防治COPD的机理。方法雄性MP-9和TIMP-1的表达情况。肺组织切片行苏木素-伊红(HE)染色,观察形态学改变。结果模型组MMP-9和TIMP-1的表达与空白组相比明显增强(P<0.01)。治疗组与模型组相比,MMP-9和TIMP-1的表达相对减弱(P<0.01)。结论益肾通肺汤能降低COPD大鼠肺组织中MMP-9和TIMP-1的表达,起到防治COPD
2、的作用。【关键词】益肾通肺汤；慢性阻塞性肺疾病；基质金属蛋白酶-9；基质金属蛋白酶组织抑制因子-1；脂多糖Abstract：ObjectiveToexploretheroleofpreventionandtreatmentofYishentongfeidecoctioninCOPDbymeasuringtheexpressionofMMP-9andTIMP-1inlungtissue.Methods36maleMP-9andTIMP-1inlungtissueeasuredbymeansofimmunohistochemistry(SP).Lungtissuesection
3、stainedbyHEorphologicalalternations.ResultTheexpressionofMMP-9andTIMP-1inlungtissueofthemodelratssignificantlyincreasedparedalrats(P<0.01),anddecreasedrelativelyparedentrats(P<0.01).ConclusionYishentongfeidecoctioncanreducetheexpressionofMMP-9andTIMP-1inlungtissueofratmodelofCOPD,and
4、haseffectonthepreventionandtreatmentofCOPD.Keya公司。 2实验方法 2.1分组 大鼠随机分为3组。对照组(A组,12只)：正常饲养,灌服等量生理盐水。益肾通肺汤治疗组(C组,12只)：在制备COPD模型的同时,于每天熏香烟前按24g/(kg?d)灌服1g/mL的益肾通肺汤煎液。模型组(B组,12只)：分别于第1、14天气管内注入LPS(200μg/200μL)；第2～30天(第14天除外)兰州牌过滤嘴香烟(焦油烟量15mg,烟气烟碱量1.0mg)烟雾；每日上下午分别将大鼠置于72L的密闭玻璃箱内,将香烟插在50mL注射针头
5、上,点燃经玻璃箱顶盖的通气孔伸入玻璃箱,先缓慢抽吸烟雾于空针内,再将烟雾推入玻璃箱内,如此反复,使玻璃箱内烟雾浓度达5%左右,30min后将大鼠移出玻璃箱,每日熏2次。30d后进行以下实验。 2.2动物处理 先将动物称重,腹腔内注入2%戊巴比妥钠(25mg/kg)麻醉,将大鼠仰卧位固定,沿正中线剪开皮肤和腹壁肌肉,剪断两侧肋骨和胸肌,暴露胸腔,从喉头以上剪断气管,将胸腔脏器摘除,一并取出心脏,分离出肺脏。用生理盐水10mL分3次行左肺支气管肺泡灌洗,总回收率为50%～80%,灌洗液(BALF)行白细胞计数及分类；于右下肺矢状面最大周径处横贯取材,10%中性甲醛固定,24
6、ｈ内石蜡包埋、切片。 2.3MMP-9和TIMP-1的检测 采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法(武汉博士德公司,SP即用型试剂盒)在石蜡切片上测MMP-9和TIMP-1的免疫组化表达,一抗为1∶100MMP-9和TIMP-1多克隆抗体,二抗为生物素山羊抗兔IgG,阴性对照标本除以PBS代替一抗外,其它步骤与被测标本相同,阳性反应为胞浆中出现棕黄色颗粒。 2.4统计学方法全部数据用SPSS13.0统计软件处理,计量资料采用x±s表示,组间采用T检验,计数资料行χ2检验。 3结果 3.1灌洗液白细胞计数及分类 (见表1)表13组BALF中白细胞计数及分类比较(略)
7、 3.2支气管肺组织MMP-9、TIMP-1免疫组化结果 (见表2)表2MMP-9、TIMP-1免疫组化表达分析(略)注：与A组比较,#P<0.01；与B组比较,△P<0.01；免疫组化表达分析实验过程空白组、模型组各死亡大鼠1只。 3.3慢性阻塞性肺疾病模型组病理学改变模型组支气管肺组织病理表现基本符合人类慢性支气管炎及阻塞性肺气肿的特点。光镜下见支气管纤毛柱状上皮细胞部分脱落,杯状细胞增生,支气管黏膜下肌层增生、肥厚,黏膜层、黏膜下层及肌层大量炎性细胞浸润；细支气管壁周围可见较多炎性细胞浸润,肺
