独一味药材中四种环烯醚萜苷的含量测定

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1、独一味药材中四种环烯醚萜苷的含量测定【摘要】目的建立独一味中四种环烯醚萜苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱PLER自动进样器，MILLIQ纯水机，B?CHI旋转蒸发仪，SartoriusCP224S电子天平Max220g，d0.1mg。　　独一味药材[药材市场购买，由刘毅副教授鉴定为唇形科植物独一味Lamiophlomisrotata(Benth.)Kudo.的干燥根];对照品Sesamoside(纯度99.87%)，Shanzhisidemethylester(纯度99.01%)，7,8-dehydropenstemoside(纯度98.25%)，8-O-acetylsh

2、anzhisidemethylester(纯度98.63%)均为本实验自制，核磁共振检测;甲醇为色谱纯(Scharlau　chemie　S.A.)，其余试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱：metry柱(3.5μm，3.5mm×100mm)，柱温：25℃，流动相为甲醇-水梯度洗脱(0～8min，12%～15%;8～11min，15%～27%;11～15min，27%;15～18min，27%～40%;18～25min，40%～48%;25～27min，60%甲醇)，流速1.0ml/min，检测波长235nm。　　2.2系统适应性及专属性实验分别取对照品溶液、供试品溶液

3、各5μl进样，记录色谱图见图1～2。在上述色谱条件下Sesamoside出峰时间为3.527min，Shanzhisidemethylester出峰时间为6.605min，7,8-dehydropenstemoside出峰时间为14.459min，8-O-acetylshanzhisidemethylester出峰时间为19.775min。供试品在相应位置有显著峰。以Shanzhisidemethylester计，理论塔板数>1500，两峰的分离度≥1.5。实验结果表明该方法能使独一味环烯醚萜苷较好分离，色谱系统的适应性及专属性良好。　　图1对照品的HPLC图谱　　图2独一味药材的

4、HPLC图谱　　2.3标准曲线的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24h的Sesamoside、Shanzhisidemethylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetylshanzhisidemethylester对照品，加甲醇制成每毫升含Sesamoside0.472mg，Shanzhisidemethylester0.880mg，7,8-dehydro-penstemoside0.188mg，8-O-acetylshanzhisidemethylester1.50mg的混合标准溶液。　　精密量取上述对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5

5、，3.0ml，分别置于6个5.0ml量瓶里，甲醇定容，即得对照品溶液。分别进样5μl，以峰面积为纵坐标，以进样量为横纵坐标进行线性回归，得各成分回归方程见表1。表14种成分的回归方程　　methylesterY=-7.37×104+1.41×106X0.99960.750～3.75　　2.4供试品溶液的制备独一味药材研细，过60目筛，精密称取细粉0.5g，置25ml具塞锥形瓶中，加70%甲醇25ml，称定重量，超声20min，冷却，用甲醇补充重量，过滤，精密吸取续滤液1.0ml，至5ml容量瓶中，70%甲醇定容，摇匀;用0.22μm微孔滤膜滤过即得。　　2.5仪器精密度实验取供试品溶液，

6、连续进样6次，10μl/次，记录峰面积，结果Sesamoside、Shanzhisidemethylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetyl-shanzhisidemethylester峰面积的RSD分别为1.53%，3.25%，2.76%，1.97%，表示精密度良好。　　2.6稳定性实验取供试品溶液于0，2，4，6，8，10h进样分析，每次10μl，记录峰面积，结果Sesamoside、Shanzhisidemethylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetylshanzhisidemethylester峰面

7、积的RSD分别为3.61%，1.20%，2.01%，3.37%。结果表明供试品溶液中Sesamoside、Shanzhisidemethylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetylshanzhisidemethylester在10h内稳定。　　2.7重复性实验取同一批独一味，按照“2.4”项下方法制备6份样品液，分别测定峰面积，结果Sesamoside、Shanzhisidemethylest