慢性粒细胞白血病患者胸腺输出功能与 bcrab

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1、慢性粒细胞白血病患者胸腺输出功能与bcrab【摘要】本研究了解慢性粒细胞白血病（chronicmyelogenousleukemia，CML）患者体内T细胞受体重排删除环（Tcellreceptorrearrangementexcisioncircles，TREC）的含量与bcrablmRNA水平的关系，进而明确CML患者的胸腺近期输出功能测定对疾病预后判断的意义。实时定量PCR检测15例CMLCP患者外周血TREC含量及bcrabl融合基因转录本的水平，并追踪检测6例患者bcrabl水平的变化。结果发现：在CML初发时

2、患者外周血TREC含量与bcrabl融合基因水平无明显的相关性；随访2年后，TREC含量高的患者bcrabl水平下降幅度更大,而在接受造血干细胞移植的2例患者中，移植前TREC含量相对较高者，移植1年后连续3次均检测不到bcrabl，另1例则检测到低水平的bcrabl。结论：CML患者胸腺输出功能较高者，可能对机体抵抗残留CML细胞有一定的帮助。【关键词】慢性粒细胞白血病胸腺输出功能bcrabl融合基因TRECRelationshipBetusOutputFunctioninCMLPatientsandTheirbcr

3、ablmRNALevelsAbstractThestudyRNAlevelsinCMLpatientsandtoevaluatetheprognosticsignificanceofrecentthymicoutputfunctiondetectioninpatientsyelogenousleukemia(CML).QuantitativedetectionofTRECandbcrablfusiongenetranscriptsinperipheralbloodfrom15CMLpatientsedbyrealtimePCR

4、.Thechangeofbcrabllevelsin6patientsRNAlevelsinperipheralbloodfromCMLpatientsforthefirstattack.Patientsopoieticstemcelltransplantation(HSCT),onepatientedtoexpressundetectablelevelofTRECbythreeconsecutivedetectionsaftertransplartation,otheronepatienticoutputfunctioninC

5、MLpatientscanbebeneficialforkillingtheresidualCMLcells.Keyyelogenousleukemia;thymusoutputfunction;bcrablfusiongene;TREC肿瘤的发生与机体免疫功能障碍有很大关系，患病机体的免疫状况可影响肿瘤的进展、演化以及预后。胸腺是免疫系统的中枢免疫器官，其功能状态直接决定机体细胞免疫功能,并间接影响体液免疫功能。T细胞受体重排删除环（Tcellreceptorrearrangementexcisioncircles,TRECs

6、)是胸腺内T细胞受体重排的副产物，可作为胸腺近期输出功能的标志［1］。行造血干细胞移植的患者，移植前或初诊时的胸腺近期输出功能与移植后相关并发症的发生或存活情况相关，它可作为判断预后的一个指标［2，3］。HIV感染患者，外周血中TREC含量与HIVRNA水平呈负相关［4］。而CML患者的TREC含量与bcrabl融合基因水平的关系以及对于疾病预后判断的意义尚不清楚。患者资料经细胞形态学、细胞组织化学和细胞及分子遗传学确诊的CML患者15例（男10例，女5例），中位年龄31（15-66）岁，均为初诊慢性期患者，并对其中6例患者bc

7、rabl融合基因水平进行追踪检测，4例患者均以干扰素复合羟基脲治疗，2年后仍处于慢性期，另外2例确诊半年内进行了异基因造血干细胞移植，收集患者外周血标本共21份。标本处理采用淋巴细胞分层液分离获得单个核细胞，取其中约1×105个细胞,应用CD3单克隆抗体和免疫荧光标记方法检测CD3+细胞阳性率，余细胞一部分按常规方法（酚抽提法）提取DNA；另一部分用于提取RNA（TRIzoL，Invitrogen产品），并应用随机引物和反转录酶试剂盒（SuperscriptIII，Invitrogen产品）反转录合成cDNA第一链，操作按说明书

8、进行。TREC的定量检测引物设计从TCRδ基因组序列（ACCESSIONAE000661）中于δRec基因片段的下游设计1个下游引物（T1）和在ψJα的上游设计1个上游引物（T2），引物的方向恰好与一般的PCR引物相反，并在该扩增片段中间设一荧光素