乌司他丁通过抑制肠黏膜细胞凋亡减轻大鼠肠道缺血

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1、乌司他丁通过抑制肠黏膜细胞凋亡减轻大鼠肠道缺血【摘要】目的探讨蛋白酶抑制剂乌司他丁(ulinastatin,UTI)对大鼠肠缺血再灌注损伤后肠黏膜屏障功能的保护作用及其机制。　方法24只成年雄性SD大鼠夹闭肠系膜上动脉1h，再灌注1h，随机分为空白对照组、对照组和治疗组。治疗组于缺血后经阴茎背静脉缓慢泵入UTI(5万单位/kg);对照组给予等量等渗盐水;空白对照组仅做开关腹并给予等量生理盐水作为对照。各组大鼠均于制模后采集标本，动态浊度法检测血清内毒素含量，TUNEL法检测肠黏膜上皮细胞凋亡率，RTPCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl2mRNA的

2、表达。结果空白对照组血清内毒素水平和肠黏膜细胞凋亡指数均低于对照组(P<0.01);治疗组BaxmRNA表达低于对照组(P<0.01)，而Bcl2mRNA表达高于对照组(P<0.01)。结论乌司他丁可能通过抑制肠黏膜上皮细胞的凋亡，维持肠黏膜屏障的完整性，从而防止缺血再灌注损伤时细菌和内毒素的移居。【关键词】乌司他丁;肠缺血再灌注损伤;细胞凋亡;Bax;Bcl2　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofulinastatinontheintestinalmucos

3、albarrierinratsiareperfusion.MethodsTotally24SDratslydividedinto3groupsafterclampingsuperiormesentericarteryfor1handreperfusionfor1h:blankcontrolgroup,controlgroupandtreatmentgroup.Ratsinthetreatmentgroupiareperfusionmodelyanipulationoftheintestineandthesamedoseofsalineeensiar

4、eperfusionmodelicturbidimetryucosalcellsethod,andtheexpressionsofBaxandBcl2mRNAinedbysemiquantitativeRTPCR.　ResultsTheserumendotoxinlevelandapoptoticindexofmucosalcellsRNAinintestinalmucosalcellsentgroupthanincontrolgroup(P<0.01),buttheexpressionofBcl2mRNAentgroup(P<0.0

5、1).　ConclusionUlinastatincanpreventthetranslocationofbacteriaandendotoxininischemiareperfusioninjurybyinhibitingtheapoptosisofintestinalmucosacellsandmaintainingtheintestinalbarrierfunction.　　KEYODS)。　　肠黏膜上皮屏障功能的维持依赖于上皮细胞增殖与凋亡之间的平衡。I/R损伤和细菌感染等因素可促使黏膜上皮细胞凋亡明显上调，导致肠黏膜上皮屏障(IBF)功能障碍

6、。乌司他丁(ulinastatin,UTI)在治疗胰腺炎及抗肿瘤、抗休克等方面的作用已受到重视[13]，而其对抗肠I/R损伤的作用，尤其是其治疗机制还没有相关报道。本研究拟从细胞凋亡角度探讨UTI对大鼠肠I/R的保护作用。　　1材料与方法　　1.1材料健康成年雄性SD大鼠24只，体重250～300g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。乌司他丁(广东天普生化医药股份有限公司);细胞凋亡原位检测(TUNEL)试剂盒(华美生物工程公司);PCR试剂盒(Fermentas);引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。　　1.2实验分组及模型制备24只成年雄性

7、健康SD大鼠，随机分为空白对照组、对照组、乌司他丁治疗组，每组8只。大鼠禁食12h，禁水4h，25g/L戊巴比妥钠(1.2mg/kg)腹腔注射麻醉。采用肠系膜上动脉(superiormesentericartery,SMA)以夹闭松夹方式复制肠I/R模型，备皮消毒后取腹正中切口3～4cm，游离肠系膜上动脉，用无损伤血管夹夹闭其起始部1h，造成肠缺血模型。治疗组于缺血后立即阴茎背静脉泵输注UTI(5万单位/kg);对照组则输注等量等渗盐水，空白对照组仅于开腹翻动十二指肠后缝合腹壁并于阴茎背静脉注射等量生理盐水。大鼠均于再灌注后1h剖杀，取回肠末端距回盲部

8、1cm处的回肠组织，40g/L多聚甲醛溶液固定。　　1.3动态浊度法检测门静脉血