植物生理学实验报告

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1、植物生理学实验报告1、愈创木酚法测定过氧化物酶活性2、可溶性蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250法）姓名：周杨班级：资环14-1学号：20147836愈创木酚法测定过氧化物酶活性一、实验目的过氧化物酶它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都宥密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性可以反映某一时期植物体内代谢的变化。通过本实验了解过氧化物酶的作用，掌握愈创木酚法测定过氧化物酶。二、实验原理在过氧化物酶（POD）催化卜，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470nm处有最人光吸收值，故⑷*通过测470

2、nm下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。三、实验材料马铃薯块茎。设备与试剂分光光度计，离心机，研钵，容量瓶，量筒，试管，吸管。100mmol/L的磷酸缓冲液（pH6.0）;愈创木酚溶液；30%H2O2;20mmol/LKH2PO4五、实验步骤（一）酶液的制备•取1.0洗净去皮的马铃薯块茎，切碎，放入研钵巾，加20mmol八KH2PO4•5ml研磨成匀浆。将匀浆液全部转入离心管中，于3000r/min离心lOmin，上清液较入25mL界量瓶中。沉淀用5mL提取1次，上淸液并入容景瓶中，定容至刻度，低温下保存备用

3、。（二）过氧化物酶活性测定•取光径lcm比色杯两只，于1只中加入已混匀的反极混合液3ml,溶液lml,作为参比液：另取一以屮加入反应混合液3ml,酶液lml（如酶活性过髙可稀释之），立即记时并置于分光光度计中。在470nm下测定光密度，每隔lmin读数一次，连续测定30min,每次测定前重新用对照校准。若气温较低，放适当提高室温，以37度为最适宜。六、实验结果酶活力=[(A-A^/C^-tJxO.OnxD=[(1.977-0.874)/10x0.01]x25=0.027575酶的比活力=酶活力/样品重或样品中

4、蛋白质的含量=0.027575/1二0.027575实验分析研磨时若未加入缓冲液或加入不及时会造成部分酶失活，从而造成结果偏小。向比色杯中加液吋过满，会造成液体溢出，同吋不方便混匀。可溶性蛋白质含量的测定（考马斯売蓝G-250法）一、目的：植物组织中的蛋白质有结构蛋白与ur溶性蛋白，酶蛋白多位可溶性蛋白测定可溶性蛋白含量在计算酶比活力和研究梢物氮代谢屮是十分重要的。二、实验原理：可溶性蛋G质与考马斯亮蓝G-250反应生成青色产物，在595nm波长有最大吸收峰，其颜色深浅与讨溶性蛋白含量成正相关，可用分光光度法

5、测定可溶性蛋白的含量。三、材料：植物材料提取液、伤流液等、分光光度计、Wml刻度试管、移液管四、操作方法：一、取10ml刻度试管6只，分别加入标准蛋內液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml,并添加蒸馏水至总量lml，即为含蛋白质0、、2、4、6、8、10微克每毫JT的系列浓度蛋0液。昀各管加考马斯亮蓝G-250五毫升，摇匀，在分光光度计595nm下，测定各管吸光度。以蛋白含量为横轴，A595为纵轴，绘制标准曲线。二、样品液lml，加考马斯亮蓝5ml，测定方法同上。五、实验结果蛋白质浓度(ug/ml)

6、0246810样品A5950.0000.1940.3700.4860.5660.7030.961吸光度0.80.70.0681X+0.0252R2=0.99460.60.50.40.3♦吸光度——线性(吸光度)0.20.16蛋白质浓度1012从标准曲线上查得样品的蛋白质浓度c=13.76ug/mL蛋白质含量(％)=((13.76ug/mLXImLX25)/1.0312gX106)X100%=0.03%六、结果分析标准曲线的精确度偏低，可能是因为测定吸光度时比色皿未洗干净。