动物生物技术

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1、第二章动物生物技术的分子生物学基础一、几种病毒基因组♦♦♦SV40病毒的®因组足一种环形双链的DNA，蕪因组5.2kb，病毒的直径45nm，病毒成熟部位细胞核，无被膜，62个核壳粒亚单位，这种大小很适于基因操作。同时它也是第一个完成基因组DNA全序列分析的动物病毒.❖腺病毒是一种无外壳的双链DNA病毒，基因组长约36kb，腺病毒的基因组以线性的双链DNA形式存在，巾蛋白VII和一种称为mu的小蛋白紧密地环绕在其周围，起到类组蛋白样的作用。另一种蛋白V将这种DNA-蛋白复合物连接起来，并通过蛋白V

2、I与病毒衣壳连接在一起。在两条链的5'端各以共价键结合着一个被称为DNA末端蛋白（pTP）复合物（DNA-TPC）的特化的结构，与腺病毒复制密切相关,腺病毒基因组的两端各有一段lOObp的反向末端重复序列（1TR）是复制的起始位点。在左端ITR的3'侧有一段长约3OObp的包装信号（*）介导腺病毒基因组包装入病毒衣壳相关。反转录病毒的最基本特征是在生命过程活动中，右一个从RNA到DNA的g制过程,即反转录过程一一病毒在反转录酶的作用下，以病毒RNA为模板，合成互补的负链DNA后，再在DNA复制、

3、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类RNA病毒。❖X噬菌体是一种温和的诱导性噬菌体，整个基因组分为5个区：头部基因、尾部基因、调控区、复制控制区、晚期基因调控区。其基因组除在5‘端有12个可互补的碱基外均为线性双链DNA,感染时末端碱基互补配对，DNA形成环状。游离在细胞质中的X可以进行滚环复制，产生多个拷贝，并合成头部和尾部蛋白，包装成完整的X噬菌体，使细胞裂解，释放出A噬菌体再感染新的细胞。二、DNA的复制❖1、DNA复制从特定的位点开始❖酵母的自主复制序列（ARS）*ATTTATPuTTTA

4、❖TAAATAPyAAAT❖2、半保留复制幻灯片19❖3、半不连续复制幻灯片20❖4、DNA复制具有髙度的忠实性*DNA聚合酶的自我校正功能♦>5、多种酶和蛋白因子协同作用（二）DNA复制机制K0复制：双链环状DNA的复制眼可以形成一种e结构，形状像希腊字母e大肠杆菌的DNA复制简单复制过程转录激活*DnaA识别并结合复制起点，DnaB—DnaC六聚体与oriC形成预引发体*DnaG加入形成引发体（oriC引发体），合成引物RNA*引物合成后，DNApol组装到引发的RNA上，完成复制体的组装(

5、T)解旋酶解开母链双螺旋2单链附着蛋白稳定解旋的母链DNADNA聚合在DNA聚合酶的作用下，前导链按5’至3’方向连续合成解旋酶单链附引物RNA弓丨物④滞后链的合成是不i引物酶合成一小段RDMA聚合酶在引物后DNA片断，称为冈山奇DNA聚合酶DNA连接酶RNA引物被另一;合酶释放，DNA：冈崎片断连接至■伸的DNA链上。5’复制终止a、终止序列E.coli有两个终止区域，分别结合专一性的终止蛋白序列一：terEterDterA序列二：terFterBterC每个区域只对一个方向的复制叉起作用b.

6、专一性终止蛋白E.coli中由tusgene编码通过抑制DNA螺旋酶而发挥终止作用2、o复制或滚环式由于复制时产生的滚环结构形状象o,称a复制病毒、细菌因子，如含有单链环状DNA的4>X174、G4、M133、线性DNA双链的复制：如：腺病毒单一起点、双向如：T7噬菌体多个起点、双向4，D环复制（细胞质DNA的复制）线粒体和叶绿体DNA的复制方式半保留复制❖1958年，Meselson和Stahl证明DNA半保留复制。半保留复制是遗传消息能准确传代的保证。是物质稳定性的分子基础。三、DNA损伤与

7、修复❖光复活❖切除修复<♦重组修复<♦SOS修复（一）photoreactivation（光复活）•可见光（最有效波长400mn）激活生物界广泛分布（高等哺乳动物除外）的光复活酶，该酶分解嘧啶二聚体。•是一种高度专一的修复形式，只分解由于UV照射而形成的嘧啶二聚体。（二）切除修复（excisionrepair）❖即在一系列酶的作用下，将DNA分子中受损伤的部分切除掉，并以完整的那一段为模板，合成出切去的部分，从而使DNA恢复正常。这是一种比较普遍的修复机制。<♦细胞的修复功能对于保护遗传物质DN

8、A不受破坏有重要意义。重组修复（recombinationrepair♦:*又称复制后修复（post-replicationrepair）❖受损伤的DNA在进行复制时，跳过损伤部位，在子代DNA链与损伤相对应部位出现缺口。通过分子间重组，从完整的母链上将相应的碱基顺序片段移至子链的缺口处，然后再用合成的多核苷酸来补上母链的空缺，此过程即重复修复。并非完全校正。（四）SOS修复❖允许子链DNA复制合成时越过亲链上受损伤的片段而不形成缺口♦>旁路系统❖是DNA受到严重损伤、细胞处于危急状态时所诱导的