论述机采血小板的常规保存和冰冻保存方法的差异对比

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1、论述机采血小板的常规保存和冰冻保存方法的差异对比-->论述机采血小板的常规保存和冰冻保存方法的差异对比提　要:目的　探讨常规和冰冻保存条件下对血小板功能的影响。方法　10单位机采血小板分别用常规保存袋和低温保存袋贮存,前者贮存5d,每天留取标本,后者于-85℃贮存后5d复苏留样。分别检测血小板聚集率、血小板计数、pH值和血小板膜糖蛋白P-选择素的变化。结果　常规保存条件下,5d内血小板聚集率、pH、血小板计数均无显著性变化,血小板P-选择素在1d后即明显升高(从3.77±1.86到10.87±4.75,达3倍,P关键词:

2、P-选择素机采血小板常规保存冰冻保存Abstract:Objective　Toexploretheinfluenceofroutinestorageorcryopreservationonplateletfunction.Methods　Tenunitsofplateletsplesofplateletethods.TheexpressionofP-selectinontheplateletsampleseasuredbyfloetry.Results　Inroutinestoragegroup,theplateleta

3、ggregativerate,plateletcountandpHvaluehadnochangeinthe5days,andtheexpressionofP-selectinincreasedsignificantlyfrom3.77±1.86to10.87±4.75(PKeyex公司,日本),TYXN-91血液凝集仪(通用机电公司,上海),OMNI血气分析仪(ModularSystem,美国),FAC-Salibur流式细胞仪(BD公司,美国),XHZ-1型血小板恒温振荡保存箱(华通公司,苏州)。1·2　试剂　　血小

4、板常温保存袋(CS3000,Baxter公司,美国),凝血酶(终浓度2nmol/L,Sigma),CD41FITC、CD62-PPE、MouseIgG/PE(Cal-tagLaboratories),ACD-2抗凝剂(上海血液中心),血小板洗涤剂(Na2EDTA+PBS)、0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)、1%多聚甲醛(Paraformaldehyde)固定液(以上试剂均为分析纯)。1·3　方法1.3.1　样品的采集与分组　　10位健康自愿献血者,按操作规程用血细胞分离机(CS3000plus)采集浓缩血小板悬

5、液,每单位血小板含量为(2.5~3.0)×1011。将每一单位血小板分装成两袋,分别用血小板常规保存袋(Baxter公司)和低温保存袋(Baxter公司);前者置22℃血小板保存箱,水平振摇,保存5d,分别在0(采血的当天)、1、2、3、4、5d留取样品;后者用一次性10ml注射器和24G头皮针缓慢(>5min)加入超滤DMSO,终浓度为5%。在加入DMSO过程中,要充分混匀,避免局部产热,封装后立即放入-85℃冰箱保存,分别于保存前和保存后5d复苏后留取样品。1.3.2　血小板聚集功能的检测　　致聚剂为凝血酶,终浓度为

6、2nmol/ml。取塑料试管2只,分别标明PPP(贫血小板血浆)和PRP(富血小板-->血浆)。血小板原液2ml,3000r/min离心10min,吸出上清液转移至PPP管;另取血小板原液0.5ml于PRP管,加入1mlPPP混匀,使血小板计数约为300×109/L。用PPP调零点。将PRP加入测试杯,加磁力搅拌珠,加凝血酶,用血液凝集仪测定,记录5min血小板聚集曲线和血小板最大聚集率。1.3.3　血小板P-选择素的检测[5]　　将血小板最终检测浓度调整为106个血小板/ml。①将7μl血小板原液加入993μl血小板洗

7、涤剂,稀释成1ml。②每一标本准备3管,分别编为A、B、C管,每管中加入上述液体100μl。③分别加入:A管:MouseIgG-1PE;B管:CD41-FITC+IgG-1PE;C管:CD41-FITC+CD62P-PE。④避光孵育15min后,加入1ml1%冷多聚甲醛(4℃),2~8℃避光保存30min,上流式细胞仪检测。1.3.4　血小板pH的测定　　血气分析仪测定血小板悬液pH。1.3.5　血小板计数　　全自动血细胞计数仪测定血小板计数。1·4　统计学处理　　采用SPMR统计程序包进行单因素及双因素方差分析。2　结

8、果2·1　血小板聚集率的变化　　在常温保存条件下随保存期延长逐渐降低,但无统计学差异。冰冻保存条件下,以凝血酶作为致聚剂时引起冰冻后血小板聚集变化不明显(P>0.05),见表1,2。2·2　血小板保存过程中pH值的变化　　在常温保存条件下,血小板pH随保存期延长逐渐降低,但变化不显著;在冰冻保存条件下,血小板pH则无