酸性丝氨酸蛋白酶asp

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1、酸性丝氨酸蛋白酶ASP-->第1章绪论1.1急性白血病1.1.1白血病白血病是一类造血干、祖细胞的恶性克隆性疾病。因细胞增殖失控，凋亡受阻，分化障碍等恶性改变，使白血病细胞阻滞在细胞发育的不同阶段。表现为正常血细胞减少，骨髓和其他造血组织中原始细胞及白血病细胞失控性异常增生，抑制正常造血功能并浸润其他脏器和组织，从}fu产生感染、出血、贫血等不同症状。白血病是造血系统常见的恶性肿瘤，在恶性肿瘤所致的死亡率中居前十位。发病人数约占恶性肿瘤总发病数的5%左右。因此，探索对其有效的治疗方法一直是科学工关注的焦点。1.1.2急性白

2、血病的分类根据白血病的病程及白血病细胞成熟程度可将其分为急性白血病和慢性白血病两大类。其中，急性白血病病情发展迅速，自然病程多在6个月以内。急性白血病又分为急性髓细胞白血病(acutemyelocyticleukemia,AML)和急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia,ALL)oAML共分MO}M7,8种类型。本实验的主要研究对象NB4细胞即属十AML中M3型急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemiaAPL)的细胞系。由十年龄、种族等个体差异的不同，APL

3、约占AML的15%，甚至更高。临床表现为早期死亡率较高，贫血，感染，极易并发弥漫性血管I}1凝血(disseminatedintravascularcoagulation,DIC)o1.1.3急性白血病的发病机制急性白血病的发病机制尚未完全确定，但总结起来大致有以下几种原因:放射性射线的照射，电磁辐射，病毒感染，化学性物质如苯的大量摄入，以学角度来讲，白血病的发生是由基因决定的，癌基因的活化，抑癌基因的失活，细胞凋亡的异常，细胞周期的变化等都是白血病发生的前提。在白血病发病的这些复杂IfIJ多步骤的过程中的染色体易位，基因

4、突变起到了决定性的作用，例如急性白血病中s0%以上患者存在特征性的染色体易位，90%的APL患者都存在t}ls;17}(q22;q21>,即17号染色体RARa(维A酸受体基因)基因与is号染色体PML(早幼粒白血病基因)基因融合并表达PML-RARa融合蛋白。但仅此一类基因突变的打击不足以导致白血病细胞的产生，目前，学者们广泛认同AML的发生遵循“二次打击”学说第一类突变累及III型受体酪氨酸激酶CClassIIIRTK)家族FLT3}141,C-KIT}Is]等引起持续性增殖信号的产生从}fu导致白血病细胞无限增生。第

5、二类突变累及调抓‘相关转录因子如前所述的融合基因的产生使细胞凋亡受到抑制，阻断细胞分化[mo。只有两类损伤同时存在才会引发白血病。本实验所用的NB4是APL细胞系，APL便是遵循两次突变分别表达FLT3和PML-RARa的结果。1.2急性髓细胞白血病的治疗目前公认的AML的治疗步骤是优先进行包括实现完全缓解CCR)在内的化学治疗，达到缓解期，然后是包括巩固和维持治疗在内的缓解后的治疗策略。1.2.1一期综合化学疗法综合化学疗法的主要药物是阿糖胞若和葱环类药物如柔y柔红霉。治疗分两个时期，首先是产生完全缓解作用，霉素或去甲氧

6、基即骨髓里的胚细胞少十s%，中性白细胞计数大十1000，血小板计数大十10000020]完全缓解是治愈或者延长生存期的唯一希一望。临床治疗AML的第一阶段CR率可达到60-80%四。但是化学疗法普遍会产生各类血细胞减少症，并引发一系列具体问题，如非典型病原体感染。严重副作用会导致患者死亡，主要产生预后因素源十患者的体质、年龄、血清白蛋白、胆红素、JJJL}i以及其他种不同的身体指数通常，治疗相关性AML以及其他综合征诱发的AML与原发性AML相比大都会对标准的化学治疗方案耐药[aa中文摘要4-6Abstract6-7第1章

7、绪论11-191.1急性白血病11-121.1.1白血病111.1.2急性白血病的分类111.1.3急性白血病的发病机制11-121.2急性髓细胞白血病的治疗12-181.2.1一期综合化学疗法12-131.2.2二期治疗策略13-161.2.3蛋.............16-181.3酸性丝氨酸蛋白酶18-19第2章材料和方法19-382.1试剂与仪器19-282.1.1主要试剂及器材19-212.1.2主要仪器及设备21-222.1.3主要实验试剂的配制22-28&nbs-->p;2.2实验方法28-382.2.1人

8、急.............28-292.2.2台盼蓝计数检测细胞活力292.2.3噻唑蓝(M.............29-302.2.4HE染色观察细胞形态学变化302.2.5流式细胞术检测细胞凋亡30-312.2.6共聚焦.............312.2.7ASP_(NJ)对阿糖胞苷、多柔比星