有关基因工程抗体的研究

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1、基因工程抗体及其研制技术的研究摘要：抗体在疾病诊断、治疗和预防中发挥着重要作用，随着基因技术，分子生物学，分子免疫学的飞速发展，基因工程抗体以及在此基础上的各种制备技术的出现和发展，使抗体的制备更加简单有效，应用前景更加广阔。关键词:抗体基因工程抗体制备技术ResearchonthegeneticengineeringantibodiesandtheirpreparationtechnologyAbstract:Antibodiesplayanimportantroleindiseasediagnosis,trea

2、tmentandprevention.Withtherapiddevelopmentofgenetechnology，molecularbiology,molecularimmunology，theemergenceanddevelopmentofgeneticengineeringantibodiesandvariouspreparationtechniques，theantibodypreparationbecomeeasierandmoreefficient，morebroadapplicationprosp

3、ects.Keyword:antibodiesgeneticengineeringantibodiespreparationtechnology1基因工程抗体概述抗体应用于医学领域已经有很久的历史了，自19世纪末用免疫动物获得抗血淸以来，这种途径一直是获得抗体的经典方法。棊因工程抗体是指应用DNA重组和蛋白质工程技术，在基因水平对抗体进行切割，拼接或修饰，重新组装成的新型抗体分子［1］。基本原理是，首先从杂交瘤或免疫脾细胞、外周血淋巴细胞等中提取mRXA,逆转录成cDNA,再经PCR分别扩增出抗体的重链及轻链基因，

4、按一定的方式将两者连接克隆到表达载体中，并在适当的细胞(如大肠杆菌、CH0细胞、酵母细胞、植物细胞及昆虫细胞等)屮表达并折叠成有功能的抗体分子，筛选出高表达的细胞株，再用亲和层析等手段纯化抗体片段［2］。基因工程抗体具有分子小、免疫原性低、可塑性强及成本低等优点［3］。2基因工程抗体分类2.1人源化的基因工程抗体人们早期曾尝试用人杂交瘤细胞来生产人单克隆抗体，但是由于人杂交瘤细胞的不稳定性，人单克隆抗体的低亲和力和伦理争议等方面的原因导致该技术很少被应用［4］。随着基因工程技术的发展人们更多的应用基因工程技术手段来

5、对鼠源抗体进行改进来生产人源抗体。1997年FDA批准第一株人源化抗体上市。2002年，阿达利单抗(Adalimumab)成为第一个被美国FDA批准的治疗性人源单抗，随后一批人源抗体和继被开发［5］。1986-2012年，美国FDA或欧洲已批准了34个治疗性抗体上市。2012年3月，我国第一个治疗性人源化单克隆抗体尼妥珠单抗临床应用研讨会在古巴举行［6］。2.1.1嵌合抗体降低鼠源单克隆抗体免疫原性的一种方法是将鼠免疫球蛋白的可变区部分链接到和应的人免疫球蛋白的恒定区［7］，这样就产生了鼠/人嵌合抗体，人源区域在6

6、0%70%应用重组DNA技术，将鼠源单抗的可变区基因与人的恒定区基因连接，构建的嵌合基因插入适当的表达质粒，转染相应的细胞后表达所产生的嵌合抗体具有结合抗原的功能，同时降低了鼠源单抗的异源性。2.1.2人化抗体为了降低嵌合抗体的免疫原性，使嵌合抗体更加人源化，产生了CDR嫁接技术［8］。该技术将免疫球蛋G的其他区域都用人免疫球蛋G取代，而仅仅保留鼠免疫球蛋白可变区的CDR部分，这就最大限度地降低鼠源抗体的免疫原性这样产生的抗体叫做人化抗体［9］。2.2小分子抗体小分子抗体以表达抗体轻重链可变区基因为主，含或不含外源

7、肽链的分子较小的抗体片段，以分子小、体内半衰期短、免疫原性低、可在原核细胞系统表达、易于基因工程操作等特点而倍受关注。主要包括单链抗体、双特异性抗体、二硫键抗体、抗体Fab段、单域抗体(singledomainantibody,SDA)、三链抗体(triabody)、抗体F(ab)2等

8、101。3基因工程抗体研制技术3.1抗体基因组合文库技术抗体基因组合文库技术简单地说就是利用抗体基因噬菌体库代替B细胞克隆来表达抗体库。因此抗体基因组合文库技术也称为噬菌体抗体库技术噬菌体抗体库技术是抗体工程领域的最重要进展，使抗体

9、工程进入丫一个全新的时期.利用基因工程的方法克隆全套抗体可变区基因并在噬菌体表面表达，得到多样性噬菌体抗体的集合即噬菌体抗体库，通过“吸附一洗脱一扩增”的富集过程，可有效地从噬菌体抗体库中筛选出特异性抗体的可变区基因.其原理以噬菌体为载体，将抗体基因与噬菌体编码的外壳蛋白in(cpin)或cpviii相连，在噬菌体表面以抗体一一外壳蛋0融合蛋0的形式表达，经