超滤膜提取当归补血汤对荷瘤小鼠脾细胞il

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1、超滤膜提取当归补血汤对荷瘤小鼠脾细胞IL：刘清君，胡敏棣，刘彩梅，巩婷【摘要】目的观察超滤膜提取当归补血汤对荷瘤小鼠脾细胞白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ)的诱生作用，探讨其对荷瘤小鼠免疫系统的调节机制。方法采用超滤膜分离技术提取当归补血汤，用双抗体夹心ELISA法检测培养脾淋巴细胞上清液中IL-2和IFN-γ的含量，用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定脾淋巴细胞IL-2和IFN-γmRNA的表达水平。结果超滤膜提取当归补血汤各剂量组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IL-2和IF

2、N-γ的含量均较模型组增高，大剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。各剂量组小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN-γmRNA的表达水平均增高,中剂量组和大剂量组与模型组比较，均有显著性差异(P<0.05)。结论超滤膜提取当归补血汤能够促进荷瘤小鼠脾淋巴细胞细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌及其mRNA的表达，从而发挥免疫调节作用。【关键词】超滤膜；当归补血汤；白细胞介素-2；γ-干扰素　　ABSTRACT:ObjectiveToevaluatetheeffectofultra-filt

3、rationextractfromDangguiBuxueDecoction(DBD)onimmunefunctionofH22bearingmouseandexplorethemechanismthroughobservingtheeffectofultra-filtrationextractfromDBDonthesecretionofthecytokines(IL-2,IFN-γ).MethodsI1640为美国Gibco公司产品；小牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品；小鼠IL-2、IF

4、N-γELISA试剂盒为北京晶美生物工程有限公司产品；Trizol为美国Invitrogen公司产品；DEPC为博士德生物公司产品；RT-PCR扩增试剂盒及Marker为上海生物工程技术服务有限公司产品；IL-2、IFN-γ、β-actin引物由上海生物工程技术服务有限公司合成(表1)。表1IL-2、IFN-γ、β-actin引物序列（略）　　1.3实验方法　　1.3.1动物分组及处理　　将小鼠随机分为5组：正常对照组、模型对照组、超滤膜提取当归补血汤大剂量组(10g/kg，相当于成人用量的20倍)、

5、中剂量组(5g/kg)、小剂量组(2.5g/kg)，每组各10只。模型对照组和3个当归补血汤组小鼠腋下接种H22肝癌瘤株细胞悬液(2×107/mL)0.2mL［5］。接种24h后，3个当归补血汤组给予等容积(2mL/100g)的相应浓度药液灌胃，正常对照组和模型对照组给予等量生理盐水灌胃，每日一次，连续15d。　　1.3.2ELISA法测定荷瘤小鼠脾淋巴细胞上清液中IL-2和IFN-γ的含量　　常规制备小鼠脾淋巴细胞悬液，加入24孔板中，每孔0.9mL，同时加入含ConA的1640培养液100μL，置

6、37℃、50mL/LCO2培养箱中培养36h，收集上清液，按试剂盒说明书操作测定IL-2和IFN-γ的含量。　　PCR反应循环参数设置为：变性温度85℃1min；退火温度55℃1min；延伸温度72℃2min；共35个循环。72℃保温7min；4℃保存。PCR产物的定量：取RT-PCR产物5μL，20g/L的琼脂糖凝胶电泳，以β-actin为内参同时扩增并电泳。凝胶成像仪记录图像并对凝胶上每一条带进行吸光度扫描定量，结果用各组的吸光度与β-actin的吸光度之比表示。实验重复3次。　　1.3.4统计学

7、处理　　实验数据以均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS10.0统计学软件进行数据处理，多组间比较采用单因素方差分析(One-RNA的表达的影响　　电泳图显示，内参β-actin的mRNA表达恒定；超滤膜提取当归补血汤各剂量组IL-2和IFN-γmRNA的条带亮度均较模型对照型增强，其中大、中剂量组小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN-γmRNA的条带亮度明显增强(图1)。各标本mRNA条带的吸光度参数与内参基因(β-actin)mRNA条带的吸光度的比值结果显示：超滤膜提取当归补血汤各剂量组小鼠脾淋巴细

8、胞IL-2和IFN-γmRNA的表达均高于模型对照组，其中大、中剂量组表达明显增高(P<0.05)；模型对照组小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN-γmRNA的表达与正常对照组比较明显降低(P<0.05，表3)。表3超滤膜提取当归补血汤对荷瘤小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN-γmRNA表达的影响（略）　　3讨论当归补血汤的有效成分为当归多糖及阿魏酸、黄芪异黄酮、黄芪异黄烷、黄芪甲苷、黄芪皂苷等非多糖成分，其有效成分的分子质量大多小于5万［6］。本实验