加味当归补血汤对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响论文

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1、加味当归补血汤对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响论文张奉梅，龚继勇，龚继梅，王兴武【摘要】目的通过加味当归补血汤（简称中药）对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响，探讨中药在肿瘤转移中的作用及其机制。方法昆明种小鼠随机分为空白组、模型组和中药组，空白组为健康小鼠，给予生理盐水灌胃；模型组和中药组为H22荷瘤小鼠动物模型，分别给予中药（中药组）和生理盐水（模型组）灌胃.freell，由山东省肿瘤医院制剂中心生产，批号：070318。大鼠抗小鼠T细胞表面标记单克隆抗体（抗CD3、抗CD4）购于steroetc公司。1.2仪器LBY-NJ

2、6型旋转式血液粘度计，LBY-NJ2型血小板聚集仪，F-820血液分析仪，BECKMAN流式细胞分析仪。1.3瘤细胞株小鼠肝癌H22细胞株，由山东省肿瘤医院基础研究中心提供。2方法2.1荷瘤小鼠模型建立取小鼠肝癌H22细胞株制成细胞悬液，计数活细胞数后培养传代两次，将培养液离心得到肿瘤细胞。将肿瘤细胞稀释成2×107/ml浓度后接种到小鼠腹腔内，0.2ml/只，瘤株在动物体内传代2次后，选择接种8d腹部明显膨大的小鼠，抽取腹水，镜下进行细胞分类计数，瘤细胞数95%，腹水用无菌PBS液稀释至2×107/ml，接种于小鼠背部近中线处，共

3、40只，0.2ml/只。2.2分组及给药肿瘤接种24h后随机分为两组，荷瘤H22小鼠20只（模型组），加味当归补血汤组20只（中药组）；另外未造模的20只健康小鼠为空白对照组（空白组）。给予空白组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水0.5ml/只，中药组给予加味当归补血汤灌胃0.5ml/只。给药后分别于10d，20d每组各取10只小鼠，末次给药前禁食16h，自由饮水，称重。2.3观察指标眶后静脉丛取血，肝素抗凝，腹腔注射麻醉，剥取肿瘤称重。测定各组小鼠全血黏度，包括低切变率和高切变率，测定血小板最大聚集率；按说明书操作应用流式细胞分析仪测定

4、T细胞亚群（CD3+，CD4+）。取脾脏和胸腺称重，计算脾脏指数及胸腺指数。脏器指数和抑瘤率计数公式：脏器指数(mg/g)=脏器重量(mg)/体质量(g)；抑瘤率=(模型组平均瘤重-中药组平均瘤重)/模型组平均瘤重×100%。2.4统计学处理采用SPSS11.5软件进行分析，计量资料用±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，以P0.05为差异有显著性意义。3结果3.1中药对荷瘤小鼠血液流变学的影响结果见表1。表1显示分组给药10d和20d后，中药组全血黏度（高切、低切）和血小板最大聚集率均较模型组降低（P＜0.05），20d时血小板

5、最大聚集率变化更明显（P＜0.01）；而模型组较空白组全血黏度和血小板最大聚集率升高（P＜0.05）；中药组和空白组各项指标比较差异无统计学意义（P＞0.05）。表1各组小鼠血液流变学的变化(略)3.2中药对荷瘤小鼠免疫功能的影响结果见表2。结果显示灌胃20d后，中药组T细胞亚群（CD3+、CD4+）较模型组升高，差异有显著性（P＜0.05）；胸腺指数、脾脏指数中药组较模型组也升高（P＜0.05）；而中药组和空白组比较差异无统计学意义。灌胃10d各项指标变化不明显（P＞0.05）。表2各组小鼠免疫功能的变化（略）4讨论全血黏度增高往

6、往导致全身和局部微循环障碍，组织缺氧诱发肿瘤转移。在恶性肿瘤发生侵袭、转移过程中，脱落于血液循环中的肿瘤细胞能引起血小板聚集，血小板的聚集可促进肿瘤细胞向血管内皮接近，并为穿过血管壁进入周围组织形成转移灶提供条件。全血黏度的高切变率主要反映红细胞的变形性，而低切变率则主要反映红细胞的聚集性。本研究显示模型组较空白组全血粘度（高切、低切）及红细胞最大聚集率均升高，说明恶性肿瘤普遍存在血液高凝状态。研究显示血管内凝血是肿瘤形成的前奏，对血栓形成通路任何形式的干预，都可有效地抑制肿瘤发展［4］。本结果显示中药的抑瘤率达32.6%，中药组小

7、鼠的全血粘度、血小板最大聚集率均较模型组降低（P＜0.05），说明加味当归补血汤能降低肿瘤小鼠升高的血黏度，具有抑制肿瘤转移及改善血液流变学作用。机体的免疫应答能力与肿瘤的发生发展有密切的联系，免疫系统具有限制肿瘤细胞生长能力。肿瘤细胞进入血液循环后，只有极少数能够逃脱宿主免疫细胞如NK细胞、巨噬细胞的杀伤，到达远处组织形成新的转移灶。参与抗肿瘤的免疫细胞包括T细胞、NK细胞、巨噬细胞等。T淋巴细胞不仅是细胞免疫的主要效应细胞，而且是主要的免疫调节细胞，其免疫调节作用是通过其亚群细胞实现的。T细胞亚群可以反映整个机体免疫功能的状态，

8、CD3+T细胞代表成熟淋巴细胞总数，CD4+T细胞具有增强和扩大免疫细胞的功能。CD4+T细胞往往协助B细胞进行分化和产生抗体，参与促进细胞介导的免疫应答［5］。胸腺和胰腺为机体免疫器官，是免疫细胞产生的场所，因此其指数也可反映机体免