部分喉切除术后喉狭窄瘢痕组织中tgf

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1、部分喉切除术后喉狭窄瘢痕组织中TGF：吴旋，苏振忠，蒋爱云赖英荣，雷文斌【摘要】【目的】研究喉狭窄瘢痕组织的病理变化,了解转化生长因子β1（TGF-β1）和?琢-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在喉狭窄瘢痕组织中表达及意义。【方法】垂直喉部分切除术后2～3个月出现喉狭窄10例和未狭窄16例喉瘢痕肉芽组织为实验组及10例正常声带组织为对照组，进行免疫组化染色，观察组织切片中TGF-β1和α-SMA的表达，并在KONTRONIBAS2.5全自动图像分析系统下进行阳性细胞计数。【结果】TGF-β1阳性表达主要分布于炎症细胞及成纤维细胞的胞浆，α-SMA阳性表达的主要分布于肌成纤维细胞胞浆。比较非

2、狭窄喉瘢痕组织及正常声带组织，喉狭窄瘢痕组织的TGF-β1和α-SMA的表达均明显增强，阳性细胞数量差异有统计学意义（P<0.05）。【结论】喉狭窄瘢痕组织的TGFβ1及α-SMA高表达，这些改变可能是喉狭窄发生重要内在因素。【关键词】垂直喉部分切除；喉狭窄；瘢痕/病理学；转化生长因子β；平滑肌动蛋白手术创伤引起喉内瘢痕过度增生，导致喉狭窄是喉外科手术常见的并发症，虽然发病率不高，但临床处理较困难。对其发生原因，临床上大多数学者认为与喉支架大块缺损、喉腔组织大范围损伤而又修复不良有关。但从喉瘢痕组织形成的病理学角度去探索形成瘢痕的机理，从而明确产生喉瘢痕狭窄个体差异原因的研究不多

3、[1，2]。喉部分切除术后瘢痕性喉狭窄的病理方面研究，国内外有关此方面报道也较少[3]。本文从瘢痕组织形成的病理学角度去探索喉狭窄形成瘢痕的机理，初步探索与创伤愈合和瘢痕形成密切相关的转化生长因子β1（transforminggrooothmuscleactin，α-SMA）在喉切除术后瘢痕性喉狭窄的发病过程中作用。1材料与方法1.1临床资料1.1.1病例入选标准①非狭窄组:声门型喉癌T2期患者行垂直喉部分切除术，单侧胸骨舌骨肌瓣重建喉腔;术后均成功拔管；随访期间未出现喉狭窄。②喉狭窄组:声门型喉癌T2期患者行垂直喉部分切除术，单侧胸骨舌骨肌瓣重建喉腔;术后早期能成功拔管，术后2～3个

4、月时出现进行性呼吸困难，需重新行气管切开，喉狭窄组织病理活检已排除复发。内镜和影像学发现喉腔瘢痕肉芽堵塞，喉腔狭窄。③正常对照组：10例双声带麻痹行声带切除患者。1.1.2临床及病理特征①非狭窄组：中山大学附属第一医院耳鼻咽喉科医院2003年4月～2005年4月间收治的16例符合入选标准的喉部分切除术患者，所有患者均为首次手术，术前术后未做过放疗和化疗，无远处转移，年龄46～71岁，平均年龄59岁，病理类型：高分化鳞癌11例，中分化鳞癌5例。按照UICC1997年TNM分类和分期法对本组病例进行分期，T2N0M013例，T2N1M03例。随访时间为6月～12月，平均10月。②狭窄组：收

5、集中山大学附属第一医院耳鼻咽喉科医院1994年1月～2005年6月期间收治的的喉部分切除术后喉狭窄患者26例,其中符合入选标准10例，入选病例术前术后均未做过放疗、化疗、无远处转移，年龄42～69岁，平均年龄56岁。病理类型：高分化鳞癌7例，中分化鳞癌3例，按照UICC1997年TNM分类和分期对10例进行分期，T2N0M08例，T2N1M02例。③正常对照组：2003年4月～2005年4月收治甲状腺手术误伤喉返神经麻痹致呼吸困难，须行声带切除术者。1.2标本提取及保存①正常对照组：取自双声带麻痹行声带切除术的10例组织蜡块；②非狭窄组：喉部分切除术后2～3个月，电子喉镜下钳取喉腔创面

6、瘢痕肉芽组织（创面边缘、中央2-3处钳取），经40g/L多聚甲醛固定，石蜡包埋，储存备用；③狭窄组：喉部分切除术后2～3个月出现瘢痕性喉狭窄，支撑喉镜或电子喉镜送检的瘢痕肉芽组织，经40g/L多聚甲醛固定，石蜡包埋，储存备用。1.3免疫组化检测组织中TGF-β1、α-SMA表达①试剂：一抗试剂购自福建迈新生物公司。TGF-β1,兔抗人多克隆抗体，编号RAB-0238。α-SMA鼠抗人单克隆抗体，编号MAB-0003。②SP法免疫组化检测试剂盒，产品编号KIT-9710，购于福建迈新生物公司。③SP免疫组化方法：组织石蜡切片，厚5μm,60℃恒温箱内烤片1h。二甲苯脱蜡和水化，酒精梯度脱

7、二甲苯，蒸馏水清洗。抗原修复：作α-SMA免疫染色的切片用高温高压修复法处理。作TGF-β1免疫染色的切片不作特别处理，置于30mL/LH2O2溶液中室温下孵育30min，以去除内源性过氧化物酶活性。PBS液洗。滴加正常山羊血清，37℃孵育10min。滴加一抗，4℃过夜，PBS清洗。滴加二抗（生物素化羊抗鼠抗体），37℃孵育20min，PBS清洗。加链霉菌生物素-过氧化物酶溶液，37℃孵育20min，PBS清洗。DAB显色剂显色，苏木素复染，片