辐射诱导重组质粒pegr-p16在黑素瘤b16细胞中的表达特性与凋亡作用

《辐射诱导重组质粒pegr-p16在黑素瘤b16细胞中的表达特性与凋亡作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、辐射诱导重组质粒pEgr-P16在黑素瘤B16细胞中的表达特性与凋亡作用2002级硕士研宄生：周莉导师：黄天华教授ExpressionPropertiesandApoptosisEffectsofpEgr-P16RecombinantPlasmidsinMelanomaB16CellsInducedbyIonizingIrradiation.Postgraduate:ZhouLiAdvisor:ProfessorHuangTianHua符号说明中文摘要英文摘要、八—1^刖g目录5，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，

2、，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，，⑴(2)(3)(5)材料和方法，，（14）结果(23)讨论(29)参考文献9今，，今，，今，，9今今，今今，(33)致谢(38)汕失大学睬学院硕士学位论文AmpBSAcDNADEPCDMSOEgr-1FCMODPBSPCREDTArpmRT-PCRTBETrisCDKsMTThGygmlminsTEEthyleneDiammineteTraaceticAcid乙二胺四乙酸rotationperminuteReversetranscriptionTris.ClborateEDTAtris(hydroxymeth

3、yr)aminomethancCyclin-dcpcndcntkinaseMethlthiazolyltetrazoliumreductionassayhourgraygrammilliliterminutesecondTris.ClEDTA符号说明AmpicillinBovineserumalbuminComplementaryDNADiethylpyrocarbonatcDimethylsulfoxideEarlygrowthresponsegene-1FlowcytometryOpticdensityPhosphate-bufferedSali

4、nePolymerasechainreaction氨节古霉素牛血清白蛋白互补DNA聚碳酸二乙酯二甲基亚砜早期生长反应-1基因启动子流式细胞术光密度磷酸盐缓冲液聚合酶链式反疲每分钟转速反转录PCRTris-硼酸盐缓冲液三羟甲基氨基甲烷细胞周期素依赖性激酶噻唑蓝法小时戈瑞（吸收剂量单位）克毫升分钟秒Tris-EDTA缓冲液辐射诱导重组质粒pEgr-P16在黑素瘤B16细胞中的表达特性与凋亡作用摘要背景和S的：根据电离辐射可诱导早期生长反应因子-l(Egr-l)基因启动子激活、启动下游基因表达的机制和抑癌基因pl6抑瘤作用，研宄pEgr-pl6重组质粒在转

5、染的黑素瘤B16细胞中的辐射诱导表达特性，验证其联合放射治疗体外抑制B16细胞增殖的作用，为临床上对黑色素瘤进行基因-放射联合治疗奠定基础。材料和方法：在己构建了含有放射敏感性启动子的Egr-1和人源性pl6基因重组表达质粒pEgr-p16基础上，将脂质体裹的pEgr-p16重组质粒，转染B16细胞株中；采用定量PCR方法检测不同剂量X射线诱导后P16的表达和同一剂量X射线诱导下pl6的表达时程；采用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化；用MTT法检测pEgr-p16基因协同放疗治疗后B16细胞的存活情况。结果：研宄结果表明pEgr-p16重组质粒转染B1

6、6细胞，不同剂量X射线均可诱导pl6表达增强，为假照组的3.78〜6.67倍(P<0.01);2GyX射线照射后，pl6表达随吋间延长而逐渐增强，在照射后72h达到最高值。pl6基因联合放射可诱导B16细胞凋亡，凋亡率高于单纯照射组和单纯基因诱导组(P<0.05〜0.01);转染pEgr-p16质粒的细胞经2GyX射线照射，8d后细胞数明显低于同时间其它实验组(P<0.05〜0.001)。结论：pEgr-p16基因-放射联合治疗有明显的抑制黑素瘤B16细胞生长的作用，其作用优于单纯给予射线或基因转染。本研究结果为探索新的肿瘤治疗方案，提高肿瘤放射治疗

7、效果具有重要的理论和实际意义。关键词：pEgr-p16基因；Egr-1启动子；基因一放射联合治疗；B16细胞；黑素瘤汕失大学睬学院硕士学位论文ExpressionPropertiesandApoptosisEffectsofpEgr-P16RecombinantPlasmidsinMelanomaB16CellsInducedbyIonizingIrradiation.ABSTRACTBACKGROUNDANDAIM：Inthisstudy，accordingtothemechanismthationizingradiationcanactivate

8、earlygrowthresponse-1(Egr-1)genepromoter，whichinducest