猪小肠黏膜下基质的生物学特性的观察

《猪小肠黏膜下基质的生物学特性的观察》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、猪小肠黏膜下基质的生物学特性的观金娟2田伟1（1沈阳医学院基础医学院解剖学教研室辽宁沈阳110034）（2沈阳医学院基础医学院08级临床4班辽宁沈阳110034）【摘要】目的制备脱细胞小肠黏膜下基质（smallintestinalSubmocosa）,探讨其作为组织工程生物膜的可行性。方法利用物理和化学方法制备猪小肠黏膜下层，利用光镜、图象分析对其进行观察及分析，皮下埋楨观察生物相容性。结果光镜显示，SIS的疏密层度逐渐加深，孔径率在70-90%之间，扫描电镜显示胶原纤维结构规整，网孔丰富，纤维连续。皮下埋植未见皮下明显的异物反应

2、。结论经过这种方法制备的SIS，初性大，结构、层次分明，生物相容性良好，是一种理想的细胞支持架，是组织工程进行组织修复的良好材料。【关键词】猪小肠黏膜下基质生物学特性观察【中图分类号】R392.12【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）01-0395-021材料和方法1.1实验材料：猪小肠的回肠段，长度为10厘米（由沈阳医学院动物实验中心提供）1.2实验方法：1.2.1制备脱细胞小肠黏膜下基质：⑴物理方法处理：取经过检疫的健康成年猪的小肠用清水冲洗干净后，挑选管腔粗细均匀、管壁无破损及无淋巴结的部位。先翻转小肠

3、，使黏膜面向外,清除小肠黏膜层直至黏膜下层暴露，再次翻转小肠，清除浆膜和肌层组织。洗净小肠黏膜下层，完全去除小肠黏膜下层上的残留组织，其间持续用4°C水冲洗［1］。⑵化学方法处理：沿纵轴切开经物理方法处理的小肠，切成每段5cm长，将小肠段在4°C的1升0.2%TritonX-100（σ化工有限公司、美国圣路易斯）含26.5mmol/L的氨水中，浸泡7天。脱细胞后，用去离子水清洗72小时,之后将猪SIS在-55°C冷冻48小时并使用环氧乙烷消毒(沈阳市中心医院)。双层PSIS支恕纵向切出40×

4、50×0.2mm3进行植入。标本在-80°C[2]贮存。1.2.2小肠黏膜下基质的形态学观察：(1)HE染色：取猪SIS膜，大小lcm×lcm,10%的甲醛固定24小时，石蜡包埋，常规切片，做HE染色。⑵扫描电镜观察：取猪SIS膜，置于预冷的2.5%戊二醛溶液内，浸泡12h,取出样品块放入0.1mol八磷酸缓冲液(pH7.2)中过夜，系列梯度洒精脱水，醋酸异戊酯置换，二氧化碳临界点干燥，真空喷金，jSM-T300扫描电镜观察并摄片。(3)透射电镜观察：取制备后的猪SIS,3%戊二醛固定，锇酸再固定，

5、梯度酒精脱水后环氧树脂包埋,作透射电镜观察。⑷图象分析：取HE染色的石蜡切片，共9组，每组随机抽取10个切片，每个切片4个视野，用Luzex-F实吋图象分析系统对实验结果进行图象分析，计算孔径大小及孔径率。⑸皮下埋植实验：取猪SIS膜，大小lcm×lcm，Wistar大鼠，体重200g左右，40mg/kg戊巴比妥钠麻醉下，在背部中间，剪幵大小为2cm×2cm大小的皮窗，充分剥离背部肌W的深筋膜，将SIS四角缝合于肌肉的表面，缝合皮肤，每隔一周取材，连续四周，石蜡包埋，HE染色观察。⑹统计学处理：用SPSS1

6、1。统计软件对数据进行统计学分析，差异性显著性采用方差分析检验。2结果2.1光镜观察：HE染色观察，未见细胞结构，PSIS结构分布冇一定的规律性，大致分为三个层次，A层，即靠近小肠黏膜一面，网孔较多，并且呈蜂窝状，向内侧,即B层，网孔的孔径逐渐变大，网孔率逐渐变小，最外层，即靠近浆膜面的C层，纤维平行排列，比较规整。(图1)随着脱细胞液浓度的增加，SIS膜的结构逐渐变的模糊不清，胶原纤维镜下变的一片红色，失去正常形态，其中0.04N、0.06N、0.08N三组比较理想，以0.08组效果最好，结构紧凑，层次分明。0.1N的SIS结构

7、开始松散，胶原纤维结构不清楚。0.12N和0.14N组结构完全被破坏。图1.光镜下PSIS形态2.2扫描电镜观察：扫描电镜观察可见管腔内面较管腔外面的网孔率明显增加，并且孔径比较小，结构致密。最外面表面非常致密，表面光滑，横断面可以看见SIS的结构层次分明，排列归整，细胞结构消失（图2）。图2.扫描电镜下PSIS形态2.3透射电镜观察：电镜下，未发现细胞的有形成分，可以看见层光栅状的胶原纤维，成垂直、平行以及交错的斜行排列，纤维之间有一定的排列规律（图3）。图3.扫描电镜下PSIS形态2.4图象分析：各组的计算结果见附表1,各组之

8、间比较，方差分析。附表1小肠粘膜下层的孔径大小统计结果2.5皮下埋植：猪SIS紧密贴敷于肌肉表面，未见明显的炎性细胞的浸润，猪SIS膜内部结构清楚，层次分明，未见塌陷和变形，而且出现血管长入的现象（图4）。图4.皮下埋植大体观察结果皮下埋植光镜下结