浅析桃叶珊瑚苷对急性脑出血大鼠脑组织的影响

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1、浅析桃叶珊瑚苷对急性脑出血大鼠脑组织的影响　　脑出血(ICH)是神经内科一种具有高致死率及致残率的多发病和常见病。目前临床上除运用传统脱水药物治疗外，治疗手段较少。ICH急性期脑组织发生一系列的病理生理变化，其中炎症反应在ICH后继发性脑损伤中发挥了重要作用。核转录因子-κB(NF-κB)是一种具有多向转录调节作用的蛋白质，通过诱导多种炎症因子表达，在脑缺血及细胞凋亡中起着中心环节的作用。本实验通过观察桃叶珊瑚苷对ICH大鼠血肿周围脑组织白介素-1β(IL-1β)和NF-κB表达及神经功能缺损评分的影响，观察其对脑出血后继发性脑损

2、害的保护作用，以探索脑出血治疗的新思路。现报告如下。　　1材料与方法　　1.1动物　　健康雄性SD大鼠90只，购于上海斯莱克实验动物有限公司，体质量250～270g。　　1.2药物与试剂　　桃叶珊瑚苷购于四川维克奇生物科技有限公司。免抗大鼠IL-1β和NF-κB免疫组化试剂盒购于武汉博士德生物试剂公司;通用型二抗免疫组化试剂盒购于北京中山金桥生物试剂公司。　　1.3分组与造模　　将大鼠按随机数字表法随机分成假手术组、脑出血组、桃叶珊瑚苷组，每组30只。治疗组于造模后2h给予桃叶珊瑚苷4.2mg/kg，腹腔注射，每日1次。假手术组及脑出血组在同样时间给予相同剂量的0

3、.9%氯化钠注射液。参照Rosenberg等报道的方法制备大鼠脑出血模型。用10%水合氯醛腹腔麻醉大鼠(400mg/kg)，将其俯卧位固定在立体定位仪上，调节门齿托的高度，使大鼠前囟前、后囟处于同一水平，沿头皮正中切一长10mm切口，无菌操作暴露前囟，定位于前囟前0.2mm，中线向右旁开3mm处钻一直径为0.5mm的小孔，进针深度为5.5mm(即尾壳核位置)。取大鼠尾静脉自体抗凝血50μL，用微量进样器在8～10min内缓慢、多次、少量注入，注血结束后留针10min后缓慢退针，局部用骨蜡封闭后缝合皮肤。假手术组于相同部位注入等量无菌0.9%氯化钠注射液。以术后见明显肢体瘫痪，大鼠

4、脑切片中有明显的圆形、椭圆形或不规则形的血肿存在为模型成功标准，不符合以上标准及死亡者剔除。所有操作均在无菌条件下进行，术毕将大鼠放回笼中饲养，自由活动进食进水。　　1.4观察指标　　1)大鼠神经功能缺损评价。参照Longa5级评分法，对神经功能评分。0级：无体征，记0分。1级：动物不能完全伸直其前肢，记1分。2级：动物一侧肢体瘫痪，有追尾现象，记2分。3级：动物不能站立或打滚，记3分。4级：无自发性活动，有意识障碍记4分。2)免疫组织化学染色检测IL-1β和NF-κB的表达。每组设置12h、2d、3d、5d、7d等5个时间点，每个时间点6只大鼠。在相应时间点用水

5、合氯醛深度麻醉大鼠，剑突下横切口，沿膈肌与胸廓交界处剪开膈肌，暴露心脏，于心尖向上进针，插入升主动脉，固定针头，剪开右心耳，快速滴入37℃0.9%氯化钠注射液100mL，至右心耳流出液体变清亮，后用4%的多聚甲醛(0.1mmol/LPBS配制，pH7.2~7.4)灌注(10mL/min)，先快后慢，约250mL。断头开颅取全脑，去除嗅脑、小脑和低位脑干，将脑组织置于浓度为4%的多聚甲醛中固定48h。于穿刺针点为中心分别向前、后各移1.0mm将脑组织冠状切开，修成包含出血区及周边区的4mm、厚约2mm的脑片，常规石蜡包埋，然后在切片机上连续切片，片厚2μm，行IL-1β和

6、NF-κB免疫组化染色。切片常规脱蜡至水，0.01M柠檬酸钠缓冲液微波修复10min;滴加一抗，4℃过夜，PBS液漂洗2min3次;加二抗，37℃孵育30min，PBS漂洗2min3次;DAB显色，中性树胶封片。在400倍视野下，用计算机图像分析系统软件随机观察并计数血肿周围4个不重复视野的不同时间段大脑IL-1β和NF-κB阳性细胞数，取其平均值。　　1.5统计学处理　　应用SPSSl3.0统计软件进行分析。计量资料以(x±s)表示，进行单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　

7、　2.1各组神经功能缺损评分比较　　假手术组无明显神经功能缺损，脑出血组与桃叶珊瑚苷组神经功能缺损呈现先上升后下降的趋势，都于术后3d达高峰，其中，桃叶珊瑚苷组神经功能缺损程度评分显著低于脑出血组(P<0.05)。　　2.2各组血肿周围脑组织IL-1β表达的比较　　假手术组仅见少量淡黄色阳性染色细胞，同组各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后12h脑出血组及桃叶珊瑚苷组脑血肿区域即出现黄色淡染细胞，术后3d两组